荧光相关谱(FCS)

FCS是基于荧光的测量方法。荧光分子被固定的高度聚焦的激光光束激发,激发出的光子经过共聚焦针孔后,被高灵敏度检测器记录。

由徕卡TCS SMD FCS系统进行FCS测量。


从自相关曲线获取定量参数

运动的粒子产生荧光强度波动,其自相关揭示分子水平的信息:相关曲线的振幅代表分子数量,分子停留在观察微区的时间包含分子运动的信息。此外,曲线的斜率和形状反映扩散类型。可从曲线得到粒子浓度质量粘度结合分量等参数。

FCS数据获取和分析原理

  1. 激光照射一个固定点(光束驻留),激发极小区域内的荧光粒子。粒子运动进入或离开这一区域便导致荧光强度的波动。用检测器以单光子计数模式记录强度波动。
  2. 用检测器以单光子计数模式记录强度波动。
  3. 计算相关函数
  4. 对相关曲线进行相应的生物物理模式拟合,获取感兴趣参数。
    • 粒子浓度
    • 扩散系数
    • 粘度
    • 分子质量
    • 结合常数
    • 光物理特性
1. Laser illumination at a fixed point of interest (beam parking) excites fluorescent particles in the excitation volume. The particle movement in and out of the confocal volume causes intensity fluctuations.
3. Calculation of the correlation function<br>4. Fitting of the corresponding biophysical model