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荧光寿命相关光谱(FLCS)和门控FCS(gated FCS)


由徕卡TCS SMD FLCS系统进行FLCS测量。

FCS通常采用连续波激光进行测量,如果用脉冲激光,则可进行更为复杂的分析,如时间门控FCS或荧光寿命FCS(即FLCS),这两种方法都利用了同时测量得到的荧光寿命信息

时间门控FCS只选择那些对荧光衰减有贡献的光子进行分析,可有效去除检测信号中的散射光(瑞利、拉曼光),获得更准确的浓度数据。

1. Removal of detector artifacts by lifetime filtering (FLCS)

FLCS对每个光子进行统计加权,确定其对FCS数据分析贡献的重要性。这可用于校正检测器误差或散射光带来的误差。

FLCS还可用一个检测器同时测量发射光谱完全重叠而且扩散系数非常相似的两种染料。

样品:表达GalNacT2-GFP 的HeLa细胞的FLCS分析。感谢Dr. Matthias Weiss, Dr. Jedrzej Szymanski and Nina Malchus, DKFZ, Heidelberg。

2. Measurement <i>in vivo</i>

4. Comparison of FCS curve (no time filter) with FLCS curve (after time filtering)

3a. Fitting lifetime decay