荧光寿命成像测定共振能量传递(FLIM FRET)

FLIM-FRET:分子标尺

FLIM-FRET是FLIM的典型应用。FRET是研究分子间相互作用的成熟技术,用于测定蛋白质结合并测算埃(10-10米)水平的分子间距离。徕卡TCS SMD FLIM系统与PicoQuant公司SymPhoTime软件的高级FRET分析工具完美结合,确保高品质的实验结果。


FRET效应

FRET实验中对可能结合的两种分子进行荧光标记,两种荧光标记物需满足以下光谱条件:即供体的发射光谱与受体的激发光谱重叠。

如果两种分子仅相距数纳米,被激发的供体便可将能量转移给供体,使后者发出荧光光子,同时供体的荧光寿命缩短。

FLIM-FRET的优势

基于荧光强度的FRET方法容易受到荧光表达水平变动或样品中分子扩散的影响,而一些外在因素如样品移动、激发光波动等也会影响FRET测定结果。

有鉴于此,FLIM-FRET因具有内校准而更具优势,它使得FRET测量不受上述因素干扰。如果发生FRET,就会观察到供体分子荧光寿命的缩短,从而可以计算出FRET发生的效率。

FLIM-FRETSP FLIM相结合,可改善实验结果的质量以及提高定量数据的精度

Donor and Acceptor are separated by distance r >>R<sub>0</sub>
At a small distance r~R<sub>0</sub> FRET gives rise to acceptor fluorescence