您通往超高灵敏度之路

  • 整合到 Leica SP 探测器模块中,用于无缝的多光谱成像
  • 出众的灵敏度允许降低光使用量
  • 高速成像的理想选择
  • 通过单光子计数定量
  • Descanned扫描或非Descanned扫描检测
  • Leica TCS SP8 的模块理念允许最多 4 个 HyD
  • 全新的 ! Leica HyD SMD – 适用于 FCS、FLIM、FLCS 和超高灵敏度成像的通用探测器
用 Bruchpilot::mStrawberry 标记的黑腹果蝇的神经肌肉接头。PMT 图像的背景被最大投影放大的残留噪声所污染,而 HyD 图像则没有此噪声。

低暗噪声 – 高对比度

敏感的活标本需要在高增益环境的弱光条件下进行成像。在识别弱染色细节时,低噪便成为决定性的优势。当想要获得最大的信号时,特别是在聚集的光子中获得更多信息的时候,低暗噪声是必不可少的。否则,噪声会在图像背景中积累起来。

Leica HyD 提供出众的信噪比,有助于渲染标本中的精细细节 – 即使是棘手的对象(例如高散射的组织切片)也是如此。通过降低暗噪声,Leica HyD 可自动提高图像对比度。您会获得更多信息内容,图像也可以随时发表,无需处理。

 

 

与 PMT 比较,Leica HyD 极大提高了对比度。

样品:微管蛋白
激发光:氩离子激光器 488 nm,总能量的 0.2%
成像:16x 累积
检测:500-620 nm
PMT 电压:800 V
HyD 增益:100%

对比率以最暗的区域(蓝色)和最亮的区域(绿圈)的平均强度比进行标注。

Contrast of PMT vs. HyD
EGFP 微管蛋白标记的秀丽隐杆线虫的三到四个细胞期。

高保真的高速成像

监测发育过程需要收集随时间变化的一系列图像。为了解开结构的时空形成之谜,需要找到采集速度和清晰度之间的合适平衡。结合 Leica Microsystems 开创性的串联扫描仪,Leica HyD 提供空前的图像质量。串联扫描仪的共振线频率(8 或 12 kHz)为平均或累积留下了充裕的空间,同时保留了大的扫描视野。

单分子检测的高灵敏度

固定的单分子代表了高灵敏度成像的终极前沿。当测量诸如靠近反射表面的弱信号时,分光系统的灵敏度、暗噪声和效率都接近其极限。注意图像上方的半月形和水平线,显示了分子的闪烁。这显示了衍射极限点的单分子属性

Polymer-embedded red fluorophores on a glass surface.
用 EGFP 在活酵母细胞的核膜和端粒上进行双标记。

增加敏感样本的细胞活性

活细胞需要承受成像时带来的光毒性。虽然许多关键机制都已了解得十分清楚,但是在研究生物系统时,光毒性的影响很难防止。

高灵敏度直接将变弱的光线输送到标本,信号淬灭更少。即使是很弱的系统(例如,酵母)也可以通过 Leica HyD 在全共聚焦分辨率的情况下进行检测。

光子计数的最大动态分辨率

由于我们的混合探测器具备非常低的背景噪声,因此光子计数可积累到任何统计学分析需要的信息量。在光子计数中,每个像素呈水桶状,供光子填充。计数越长,收集的光子越多。可以使用较高的色深模式(12 bit 和 16 bit),代表非常大的“水桶”:12 bit 模式中,一个像素能容纳 4096 个光子,16 bit 能容纳 65356 个光子。因此,可获得统计学上像素差异极低的巨大动态范围。光子数通过查找表 (LUT) 显示在屏幕上。在本实例中,颜色有一个物理等效物:光子。

快速简便的 NDD 图像采集。斑马鱼胚胎:侧线 (GFP)、神经元 (DsRed)、肌肉 (SHG)、细胞核 (BFP)。Lionel Newton,海德堡大学 EMBL(Gilmour 实验室)惠赠。

深部组织成像的出色灵敏度

 

 

多光子显微镜对信号检测有特殊要求,因为发射光来自深部组织切片,被周围结构散射。 

为了提高光收集的效率,探测器与发射光源要放置得尽可能近(非Descanned扫描检测,NDD)。

 

RLD位置的混合探测器为您提供具有出众灵敏度的较亮图像。需要的发射功率较低,确保标本损坏较小,同时出众的信噪比能显示深层组织切片的更多细节。

 

新的 QUAD 模块由四个 RLD 位置的混合探测器组成,赋予您在多颜色深部组织实验中的最高灵活性。由于其具备模块化设置,您可选择您需要的尽可能高的超高灵敏度,进行快速非Descanned扫描的多色图像采集。

 

 

Leica HyD SMD – 用于 FCS、FLIM、FLCS 和超高灵敏度成像的通用探测器

分析灵敏度是进行可靠的单分子检测的必要条件。

Leica Microsystems 已开发出特殊的拥有出众特性的混合探测器,适用于所有 SMD(单分子检测)方法,完全整合在 SP 检测系统中。一个有效的冷却系统由内置的热电制冷和额外的外部冷却系统组成,减少 Leica HyD SMD 特有的暗噪声,获得最高质量的 SMD 数据。

其极低的暗噪声和高量子效率与直接耦合的无滤片的光谱探测器组合起来,让 Leica HyD SMD 成为适用于所有 SMD 应用和类似的高级成像任务的通用探测器。

  • 事实上,没有探测器的后脉冲可采集精确的扩散数据
  • 较少的光漂白使得 FCS假象更少
  • 在互相关实验中的串扰最小
  • Descanned扫描位置允许使用所有可用的激光器
  • 直接耦合,允许获得高光子计数
  • 由于仪器响应时间短,因此可探测短寿命的染料

通过 HyD 和 Huygens 进行高分辨率成像

Leica HyD 通过深对比度传递精细的图像细节。但是,对深挖掘的研究任务,您可能需要从您的共聚焦实验中获得更多细节。通过将我们超高灵敏度的混合探测器和来自技术领导者 SVI 的值得信赖的数学 Huygens 反卷积软件结合起来,Leica TCS SP8 高分辨率成像系统可轻松将您的共聚焦图像分辨率提高一倍,并在高保真度情况下传递涵盖每个细节的精细的多色图像

混合探测器技术 –
两个世界的最佳选择

光电探测器将光转换为电信号,使其成为记录流程中的关键部分。Leica HyD 将经典的 PMT 的最佳特性与高灵敏度的雪崩光电二极管(APD)组合起来。这样就获得了超高灵敏度和高动态范围,并同时具备高检测速度和低暗噪声,使其成为所有样本的理想探测器。

Leica HyD 光电检测器与用于 PMT 和 APD 的功能元件结合起来。HyD 的光电检测非常有效,因为它们几乎没有损失光子。暗噪声水平极低,能够提供有效的信号恢复。雪崩元件允许即时响应和非常尖锐的电脉冲。即使是在高强度情况下,也可能进行光子计数。

可以在我们的在线辅导中找到更多有关 HyD 功能和光子技术的信息。