The Evolution of Resolution

三维定位显微镜的超分辨率系统 Leica SR GSD 3D

将分子和结构的精确三维定位进行可视化对于更好地理解细胞过程颇为关键。Leica SR GSD 3D广角荧光显微镜基于GSD(基态损耗)或dSTORM(直接随机情形光学重建显微镜)技术,不仅提供二维,而且还提供三维超分辨率成像 – 是迄今为止在广角镜领域具有最高的精度、可重复性及最大可能的分辨率。Leica SR GSD 3D基于全自动全内反射荧光(TIRF)系统。作为一个多功能系统,它让研究者能够自由地将该系统进行精确地量体裁衣,以适应其在活细胞或先进荧光成像方面的应用。

对人类内皮细胞( Huvec)的角落进行三维重建,以Alexa 647 Ab.介质:gloxy样缓冲液对波形蛋白进行了染色。荷兰阿姆斯特丹的K. Jalink和L. Nahidi Azar提供。在培养的细胞中对F-肌动蛋白(标以鬼笔环肽- Alexa 647)进行三维重建。可以看到肌动蛋白丝缠绕着核被膜(图像的左上部分)。该图像显示了一个堆叠了4个部分重叠的Z-堆栈的构造。荷兰阿姆斯特丹的K. Jalink和L. Nahidi Azar提供。

x、y和z的安全本地化和最大分辨率

设立精度、稳定性和光学性能方面的新标准

采用随机情形光学重构显微术(GSD ordSTORM )能够实现超分辨率图像,其横向分辨率高达20nm。然而,宽视场显微镜的z-分辨率仍仅限于几百纳米的范围。作为超高分辨率显微镜的先驱,Leica Microsystems开发了Leica SR GSD 3D突破了这个限制,达到在轴向上50nm的分辨率,并在三维定位精度方面设置了新的标准。

Leica SR GSD 3D以其本地化单分子的独有精度、其系统的稳定性、光学性能及其易于操作性取胜。这些属性对于在最短的时间内产生可重现的高品质结果是十分重要的。所有的光学元件在复消色差方面均被修正为Leica Microsystems的高标准。该软件能够进行精确的校准,此外,还有具备黄金珠的标准校准、具备样本的荧光珠或染料分子的特定颜色校准可供选择。

此外还有所有那些广为人知的好处...

最大横向分辨率降至20纳米

Leica SR GSD 3D基于GSDIM技术,优于其他超分辨率系统先前设定的分辨率极限。 GSDIM和STED是由德国哥廷根马克斯·普朗克研究所的Stefan Hell申请了专利,并独家授权给Leica Microsystems。

在线超分辨率图像投影 - 看到了您真实原样的结果

Leica SR GSD 3D提供了超分辨率图像的在线图像投影。在采集过程中,用户看到了网上建立的图像。此功能使您可以完全控制您的实验 – 您可以决定停止或继续进行图像采集,以实现令人满意的成果。

在多功能活细胞成像系统上将超分辨率与TIRF和落射荧光相结合,提供了全面的应用灵活性

该工作站可让您执行您的日常实验,从高速成像到时移到TIRF,并不断地将您的成像扩展到超分辨率的球体中。

标准荧光染料可用于 – 无需更改您的协议

GSD工作流程基于标准的免疫染色技术,完美集成到荧光显微镜现有的工作流程中。

... we Have Redefined the Limits of Super-Resolution

by Adding the Z Dimension

最大激光稳定性、最低自动荧光和最高色彩校正

特殊设计的超分辨率高功率物镜

Leica SR GSD 3D配备了专门为超高分辨率显微镜开发的160倍的高性能物镜。其设计在高功率激光辐射上进行了优化。极低的自体荧光保证了高信噪比,这对于单分子检测应用较为理想。出色的复消色差校正进一步提高了图像的效果。

用柱面透镜在发射光束路径中进行精确的定位

以散光法进行三维定位的原则

对于GDSIM或dSTORM荧光显微镜中单分子的定位,每个分子的点扩散函数(PSF)均进行了记录,并且执行了匹配来确定荧光团的位置。用普通的荧光显微镜,荧光团的横向位置被定义为常规的PSF(左)。如果柱面透镜被添加到该系统中,则获得了一个不同的PSF(散光)(右)。对应的图像能够确定所检测到的分子的z位置,从而实现了三维重建。

为了确保结果的可重复性,只要系统从二维切换到三维录制,柱面透镜即可精确地定位到发射光束路径中 - 不是用手,而是通过软件控制进行一次鼠标点击来自动完成。

SuMo Stage将漂移最小化来进行分子的精确定位

精度和稳定性上零妥协

Leica Microsystems用SuMo Stage引进了漂移补偿新技术,将采集过程中最大系统漂移置于分辨率以下。这使我们有可能观察到最为真实的超分辨率图像。特殊的SuMo技术(Supressed Motion),确保在检测过程中的最小化漂移以及最高的稳定性。

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