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Leica TCS SP8 STED

Nanoscopia profunda, 45-65 μm dentro de una muestra de riñón adulto limpiado. Pila xyz de 20 µm confocal/STED 3D. Nefrina vista con STAR 635P. Eliminación por el protocolo CLARITY modificado. Objetivo STED: HC PL APO 93X/1.30 GLYC motCORR – STED WHITE. Muestra cortesía de David Unnersjö-Jess, Real Instituto de Tecnología, Estocolmo, Suecia.

¿Le gustaría comenzar con la captura de imágenes STED?

No es necesario invertir en un instrumento especializado para observar los detalles de la vida. Los nuevos nanoscopios Leica TCS SP8 STED ONE 592 y STED ONE 660 representan su acceso estratégico a la nanoscopia gracias a la altamente versátil e innovadora plataforma confocal Leica TCS SP8. La detección espectral en combinación con la sensibilidad de los detectores híbridos Leica HyD y la libertad de excitación ofrecida por el láser de luz blanca hacen del nanoscopio STED de Leica Microsystems una herramienta de máxima flexibilidad no solo para la nanoscopia.

Si necesita tener acceso a tantos fluoróforos y colores como sea posible, el Leica TCS SP8 STED 3X le permite utilizar hasta tres líneas STED que facilitan el STED sobre todo el espectro visible.

Tecnologías que fortalecen su ciencia

  • La nanoscopia sintonizable en x, y y z sintonizable revela los detalles más pequeños
  • Los objetivos STED WHITE ofrecen una corrección de color óptima para todo el espectro
    Objetivo motCORR STED para imágenes en vivo profundas
  • Las múltiples líneas del STED abren el espectro completo de la luz visible
  • La detección cerrada mejora la resolución y aumenta las capacidades de las células vivas
  • La alineación automática del haz proporciona estabilidad y fiabilidad
  • El asistente Smart STED controla de forma intuitiva sus experimentos
  • La deconvolución Huygens obtiene más rendimiento de sus datos brutos
  • El concepto modular basado en el TCS SP8 permite actualizaciones en cualquier momento

«El STED 3X ha dado un salto cuántico al expandirse en nuevas dimensiones: la captura y el procesamiento de imágenes de súper-resolución multicolor de la célula seguramente revolucionará la biología celular».

Dr. Yasushi Okada, Centro RIKEN de Biología Cuantitativa, Osaka, Japón

El «Premio 100 I+D 2014» y el «Premio a las 10 mejores innovaciones científicas 2014» reconocen al Leica TCS SP8 STED 3X entre los productos de alta tecnología más significativos presentados en 2014.
Imagen STED de inmunotinción triple en células HeLa, verde: NUP153-Alexa 532, rojo: Clatrina-TMR, blanco: Actina-Alexa 488.

Nanoscopia multicolor

Cubierta de todo el espectro de luz visible

Las aplicaciones multicolor dan acceso a información detallada sobre las interrelaciones de varias estructuras. Los estudios de colocalización se realizan de forma rutinaria con el nanoscopio STED ONE. Las múltiples líneas láser STED del STED 3X  a 592 nm y 660 nm y el láser pulsado a 775 nm, que alcanza resoluciones por debajo de 30 nm, cubren todo el espectro de luz visible y dan acceso a muchos fluoróforos aplicables.

¡Más colores marcan la diferencia!

El láser de luz blanca, el AOBS (divisor de haz acústico-óptico) y el detector espectral sintonizable le permiten, de un modo coordinado, capturar cualquier tipo de combinación de fluoróforos y le ofrecen la mayor flexibilidad para su experimento multicolor.

«Para mí, STED significa ver los detalles esenciales».

Prof. Stephan Sigrist, Universidad Libre de Berlín, Alemania

Nanoscopia potenciada por óptica de vanguardia

STED WHITE – no compromete la óptica

Cuando se trata de resolver detalles muy pequeños, es crucial comenzar con la mejor óptica. La excepcional corrección cromática de los dos objetivos STED WHITE asegura la superposición óptima de la excitación y STED PSF en z en todo el rango de espectro visible. Se puede utilizar el láser de luz blanca como fuente de excitación para STED a 592/660/775. Disfrute de la libertad de elegir entre más fluoróforos que nunca para la nanoscopia STED.

Objetivo STED para la nanoscopia de células vivas

Las muestras fijjadas estándar se capturan como imágenes con facilidad con el objetivo de aceite STED WHITE (HC PL APO 100x/1.40 ACEITE). Proporciona una AN y una resolución más altas. Para experimentos más complejos, el nuevo objetivo de glicerina STED WHITE (HC PL APO 93X/1.30 GLYC motCORR) crea nuevas oportunidades. El anillo de corrección motorizado permite un ajuste rápido y preciso de las lentes ópticas para variar el grosor del cubreobjetos de vidrio, los cambios de temperatura y la falta de homogeneidad de la muestra. Ilumine los detalles del interior de su muestra con STED 3D no solo a temperatura ambiente, sino también a 37 °C.

"The lens is a must, everybody should have it!"

Dr. Yasushi Okada, RIKEN Quantitative Biology Center, Osaka, Japan

Aberración cromática de los objetivos STED WHITE. Profundidad de campo representada en línea gris discontinua y sólida, respectivamente.

Gated STED - su puerta de entrada a la nanoscopia de células vivas

Imagen de células vivas: vesículas de núcleo denso etiquetadas ANF GFP moviéndose a lo largo de axones aprox. a 10 μm de profundidad dentro de una larva de Drosophila anestesiada intacta. Se grabaron una imagen confocal y una imagen STED cada 0,45 segundos. Vídeo anterior: Seguimiento de partículas realizado por TrackMate (Fiji).

Gated STED - su puerta de entrada a la nanoscopia de células vivas

Gated STED amplía sustancialmente la funcionalidad del probado STED CW, ofreciéndole la opción de una resolución más alta o una menor potencia del láser.

Se obtienen más imágenes y se revelan detalles más pequeños.

«De hecho, de todas las modalidades de STED presentadas hasta ahora, g-STED proporciona las imágenes más nítidas con la potencia de pico más baja».

Vicidomini et al., Nature Methods 2011

Célula T viva en suspensión. Reconstrucción en 3D de pilas confocales y STED. Proyección máxima. Cortesía de Marco Fritsche, Mathias Clausen y Christian Eggeling, Unidad de Inmunología Humana MRC, Instituto Weatherall de Medicina Molecular, Universidad de Oxford, Reino Unido.

Resolución inferior a 50 nm con HyD y láser de luz blanca

Los detectores híbridos Leica HyD junto con el láser de luz blanca como fuente de excitación pulsada permiten la detección de señales que hay que limitar a un determinado portal de tiempo después del impulso de excitación. Al alejar el portal de tiempo del impulso de excitación, se puede alcanzar una resolución muy por debajo de 50 nm. Con la misma potencia del láser, el gSTED  alcanza una resolución un 50 % más alta que el STED CW. Se pueden observar detalles más pequeños sin la necesidad de aplicar más luz de STED, aumentando la viabilidad de las células vivas.

Distribución permanente de fluoróforos en el punto focal efectivo de un microscopio STED CW. Los tiempos de vida larga (rojo) están situados en el centro, mientras que los de vida corta (azul) se sitúan en la periferia.

STED en la 3ª dimensión

Múltiples rutas de luz de STED

Con TCS SP8 STED 3X y TCS SP8 STED ONE, se dispone de dos rutas de luz en el instrumento que generan diferentes patrones STED. La luz de STED se puede distribuir de forma continua entre las dos trayectorias.

Diseñe su PSF

Puede elegir entre la mejor resolución lateral, la mejor resolución vertical o cualquiera intermedia para obtener resultados óptimos. Las secciones ópticas ultra finas revelan detalles desconocidos. STED 3X y STED ONE le permiten ajustar la resolución de su microscopio en todas las dimensiones para sus preguntas y muestras.

«Añadir la tercera dimensión y una línea STED adicional a la imagen STED nos permite ver cosas que eran imposibles de ver antes».

Dr. Timo Zimmermann, Centro de Regulación Genómica, Barcelona, España

Reconstrucción en 3D de superficie renderizada después de deconvolución Huygens de pila z (91 planos). Los datos STED muestran un claro aumento de la resolución lateral cuando se utiliza STED para maximizar la resolución en xy (sector verde trasero) o en todas las dimensiones (sector verde delantero) en comparación con el resultado confocal (rojo). Claramente, la mejor representación de la estructura observada se obtiene por STED 3D.

Seleccione su resolución

Mejoras de la resolución mediante la asignación de la luz a las dos vías STED: la mejor resolución lateral se logra mediante el clásico dónut vórtice, y la mejor resolución vertical mediante el innovador dónut z. También se puede optimizar para el volumen focal más pequeño.

Soluciones de software para STED – conozca su resolución

El microscopio STED es el camino más rápido y directo a la súper-resolución. El LAS X le ofrece las mayores ventajas posibles. Un trazado de la PSF eficaz estimada le proporciona una respuesta visual directa y en línea sobre los efectos de los parámetros técnicos elegidos.

Flujo de trabajo intuitivo

El asistente Smart STED le permite controlar el instrumento con tres correderas simples. Con ayuda del diseño de la PSF eficaz, se define el nivel general de súper-resolución que necesite. Para obtener resultados óptimos, el asistente configura todos los ajustes necesarios, como la intensidad del láser STED, el tamaño de los píxeles, el tamaño del paso z, el pinhole, los ajustes del portal y el promediado.

Potente deconvolución Huygens STED

Con cada sistema TCS SP8 STED 3X, obtendrá en exclusiva un potente paquete de deconvolución Huygens STED de SVI. Huygens aumenta el contraste radicalmente y también mejora la resolución en x, y y z. El resultado se puede comparar directamente con los datos brutos. No existe riesgo de ser confundidos por los artefactos de procesamiento de imágenes.

«La capacidad de efectuar STED en 3D llevará nuestra investigación al siguiente nivel, justo donde se encuentran las necesidades de los investigadores».

Dr. Christian Eggeling, Universidad de Oxford, Reino Unido

Flujo de trabajo de Smart STED: 1. Ajuste la PSF eficaz deseada con el STED y la corredera 3D. 2. Elija entre señal-ruido y número de imágenes con la corredera de dosificación. 3. Defina el área de interés durante un barrido confocal en vivo y ajuste la excitación en consecuencia. 4. Recopile sus datos súper-resueltos capturando una imagen o comenzando una serie.