140 nanómetros de resolución lateral con HyVolution

Detectores súper sensibles HyD y deconvolución Huygens pueden resolver estructuras de 140 nm. Espécimen: moléculas individuales de ADN origamis con 140 nm de distancia definida. Comparación de los resultados utilizando HyVolution e imagen confocal.

Máxima resolución dinámica mediante contaje de fotones

Relación señal-ruido superior

El contaje de fotones proporciona una relación señal-ruido mucho más alta que el tradicional promedio de intensidades. El promedio de intensidades es el estándar de facto en todos confocales comerciales que utilizan “multialkaline o GaAsP PMT”.

El Leica HyD es el único fotodetector con una alta resolución temporal que permite la resolución de fotones individuales, incluso a altas tasas de conteo que se utilizan normalmente para la imagen. Con el Leica HyD obtendrá información de sus imágenes más fiable que con cualquier otro detector totalmente integrado en un microscopio confocal.

Alto rango dinámico

El Leica HyD cubre el rango de frecuencias en un detector desde el contaje de fotones a imágenes. La información completa está contenida en una imagen. Esto significa una gran flexibilidad para sus experimentos de confocal y menos artefactos de procesamiento de datos.

La frecuencia de muestreo en un sistema de contaje de fotones está fuertemente ligada a la relación señal-ruido. Un sistema de contaje de fotones convencional con baja tasa de muestreo, por ejemplo, 15 MHz, puede detectar sólo un pequeño número de fotones, que se asocia con un nivel relativamente alto de ruido. A mayores tasas de conteo, la señal se satura y ya no es cuantitativa. Sin embargo, los marcadores típicos en muestras biológicas emiten a tasas de entre 15 y 40 MHz.

Con su muestreo rápido, el Leica HyD detecta mayores tasas de fotones con bajo nivel de ruido que resulta en mejores imágenes que los PMT o APD. En el modo de contaje de fotones, el HyD es lineal hasta 60 MHz, y la linealidad en modo estándar está garantizada incluso hasta 300 MHz.

El contaje de fotones permite mayor cantidad de información, que se acumula según sea necesario para el análisis estadístico.

STED Super-Resolution

Resolver por debajo de 30 nanómetros

El Leica TCS SP8 STED 3X ofrece verdadera súper-resolución para resolver detalles por debajo de 30 nm. Está totalmente integrado en la plataforma confocal Leica TCS SP8 y da acceso rápido e intuitivo, y acceso puramente óptico a los detalles estructurales mucho más allá del límite de difracción - lo suficientemente rápido incluso para imágenes de células vivas.

 

 

STED pulsado a 775nm de 45 nm Origamis ADN
- 45 nm pico a pico
- FWHM de un único pico por debajo de los 30 nm

AOBS – The Most Versatile Beamsplitter

Imagen espectral de fluorocromos cercanos con una eficiencia mayor al 30%

En la microscopía confocal, la luz de excitación entra en la muestra en el mismo lado por el que se recoge la emisión. Un divisor de haz separa la luz de excitación y emisión.

El AOBS (Divisor de Haz Acústico Óptico) es un cristal activo de TeO2 completamente transparente, que ofrece la máxima eficiencia de fotones. Una onda acústica acoplada en el cristal cambia sus propiedades de transmisión. Se cambia en microsegundos, simplemente cambiando la frecuencia de radio de la onda. Esto hace de los AOBS un divisor de haz flexible, eficiente y rápido.

Las bandas de reflexión del AOBS tienen un corte abrupto y un ancho de banda estrecha que permite la recogida de hasta 30% más de luz de emisión.

El AOBS puede alojar hasta ocho bandas de reflexión. Puede utilizar líneas de excitación muy próximas entre sí para obtener imágenes simultáneas de combinaciones de colorantes únicos como GFP y YFP. Como resultado, la separación de colorantes se puede realizar fácilmente sin “Unmixing” y los artefactos relacionados.

Arriba: Todas las longitudes de onda son totalmente flexibles con el AOBS, permitiendo utilizar líneas de excitación muy próximas entre sí como para GFP y YFP, imposible en cualquier sistema con rueda de filtros.
Abajo: Los escarpados picos del AOBS incrementan la eficiencia de la transmisión hasta un 30%.

Detección súper sensible con Leica HyD 

Especímenes vivos sensibles necesitan ser adquiridos en condiciones de poca luz en situaciones de alta ganancia.

El Leica HyD le ofrece una relación señal-ruido superior para ayudar con los más mínimos detalles de cualquier espécimen - incluso los más difíciles, tales como cortes de tejido con alta dispersión.

Al reducir el ruido oscuro, el Leica HyD mejora automáticamente el contraste de la imagen, y le proporciona de inmediato imágenes listas para publicar.

Haga clic aquí para leer más acerca de la tecnología de detección híbrida.

Eficiencia fotónica sin pausas

El sistema de detección espectral sin filtros está diseñado para ofrecer la detección simultánea de bandas ajustables de emisión sin espacios.

Este diseño patentado con el uso de un prisma representa el concepto de dispersión más eficiente. En contraste con diseños basados en rejilla, no hay desperdicio de fotones y por lo tanto no hay necesidad de bucles de reciclado.

Rango dinámico adaptable

A diferencia de los diseños de detección espectral basados en matrices, el detector del Leica SP permite un balance personalizado entre la sensibilidad más alta y el rango dinámico más alto. Detectores discretos permiten ajustes de ganancia individuales para cada detector, en lugar de estar obligados a utilizar la misma ganancia para todos los elementos de la matriz. Cada detector de punto se adapta individualmente al rango dinámico de diferentes marcadores sin pérdida de fotones. Esta es la base para separar los marcadores mediante “linear unmixing” sin restauración matemática.

Rango dinámico adaptivo del detector SP. El diseño de detección SP utilizando detectores puntuales individuales evita dos inconvenientes inherentes de matrices multiánodo: pérdida de la dinámica y las lagunas espectrales.

Alta velocidad para muestras vivas

El escáner tándem une el escáner FOV con un sistema de escaneo resonante basado en espejos galvanométricos conmutables.

  • 22 mm FOV – el mayor de cualquier sistema de barrido puntual
  • Barrido X2Y con tres espejos para iluminación homogénea
  • Combinación única de FOV y sistema de barrido resonante de 8 kHz o 12 kHz  con espejos  galvanométricos conmutables
  • Frecuencias de barrido hasta 12 kHz, resultando sobre 40 fps (512 x 512 px) o 428 fps (512 x 16 px)
  • Adquisición de series 4D hasta 50% más rápida que sistemas comparables, combinado con “SuperZ GalvoFlow”
  • No compromiso en resolución, sensibilidad o contraste, usando los objetivos con alta apertura numérica y los sensibles Leica HyD RLDs
1800 Hz Conventional -> 12 khz Resonant -> SuperZ GalvoFlow

Leica HyD

Una solución viable

Las células vivas sufren efectos fototóxicos inherentes como resultado de la formación de imágenes.

La alta sensibilidad de los Leica HyD permite directamente una reducción de la cantidad de la luz entregada a la muestra. Esto mejora la viabilidad de su espécimen.

Incluso organismos delicados, tales como levadura o gusanos, son accesibles con la detección híbrida con excelente resolución confocal.

Células de levadura en vivo con doble marcaje con EGFP, tanto en la envoltura nuclear como en el telómero.

Spectral Detector

Detección simultanea de bandas de emisión sin huecos

Para diferenciar entre diferentes emisiones de un espécimen, es crucial tener un sistema de detección espectral que permite la grabación de varios canales simultáneamente. El detector espectral de cada Leica TCS SP8 permite la detección simultánea de cinco canales diferentes a través de un elemento dispersivo a base de prisma y la disposición en cascada de espejos deslizantes ajustables.

Dispersión del prisma y detección espectral. La luz emitida pasa a través de un prisma (1) que descompone la luz en sus componentes espectrales. Una banda estrecha de longitudes de onda puede ser seleccionada por la inserción de una ranura mecánica (espejos) de deslizamiento (2). El resto del espectro es dirigido por los espejos altamente reflectantes a los detectores posteriores (3). Una cascada de ranuras mecánicas construidas a partir de espejos altamente reflectantes permite la adquisición de hasta cinco canales simultáneamente, sin pérdidas.

Prism Gráfico de dispersión y detección espectral

AOBS y WLL

Confocal libremente sintonizable

El WLL (láser de luz blanca) utilizado en el TCS SP8 X cuenta con una fuente de luz blanca que cubre el rango espectral de 470 nm a 670 nm.

 

El AOBS es clave para la selección de cualquier longitud de onda del espectro blanco y maximiza las ventajas del WLL. Hasta ocho líneas pueden ser seleccionadas a partir del espectro. Cada línea se puede ajustar libremente en color y en intensidad, que se traduce en ¡8 = 40320 combinaciones!.

 

La iluminación continua sintonizable y el divisor de haz están perfectamente completados por la detección continua sintonizable del detector SP. Puede recoger las bandas de transmisión entre las líneas de excitación por las bandas espectrales sintonizables - con una eficiencia de transmisión máxima y en cinco canales verdaderos de emisión de forma simultánea, lo que permite aplicaciones multicolor reales.

Arriba: El láser de luz blanca permite detectar hasta 8 líneas del espectro, todas sintonizables libremente en longitud de onda e intensidad.
Abajo: Todas las longitudes de onda son totalmente flexibles con el AOBS que permite utilizar líneas de excitación muy próximas entre sí como GFP y YFP.
Con el paquete de visualización LAS X 3D se incluye un monitor de 4K en cada Leica TCS SP8.

LAS X Software

Opciones internas

Nuestra plataforma de software Leica Application Suite X (LAS X) se puede personalizar a sus demandas y le ayuda en la planificación, ejecución y análisis de sus experimentos.

Explore y analice

El diseño orientado del flujo de trabajo y los intuitivos asistentes le guían paso a paso a través de la adquisición, procesamiento y análisis de imágenes. Adapte LAS X a sus necesidades con paquetes de software adicionales, como la visualización y análisis en 3D, que le permiten comprender la topología de la imagen 3D y cuantificar diferentes aspectos de las estructuras intracelulares.

El examen y análisis de sus experimentos resultan extremadamente fáciles usando Leica TCS SP8 y LAS X.

Sin CAM (arriba): Los acontecimientos importantes pueden pasarse por alto. Con CAM (abajo): Resolución de tiempo se incrementa temporalmente como sea necesario. Los procesos se estudian con más detalle y con mejor rendimiento.

Empiece a pensar en grande

Los progresos en sus descubrimientos pueden suceder cuando usted está en el lugar correcto en el momento adecuado. Leica HCS A puede acelerar el proceso de los descubrimientos a través de “high content screening” y le permite estandarizar aplicaciones biológicas para resultados rápidos y reproducibles.

Computer Aided Microscopy (CAM) permite la detección de eventos raros que utilizan el software de análisis de imagen externo como ImageJ o Cell Profiler. Los datos se transmiten de forma continua a un almacenamiento externo y el análisis de imágenes se lleva a cabo en paralelo a la adquisición de datos. Leica HCS A puede responder a la retroalimentación del software de análisis, lo que simplifica los grandes los procesos de cribado.