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Leica TCS SP8 STED

Nanoscopie profonde 45-65 µm dans un échantillon de rein adulte clarifié. Pile confocale xyz 20 µm/3D STED. Néphrine observée avec STAR 635P. Éclaircissement par le protocole CLARITY modifié. Lentille STED : HC PL APO 93X/1.30 GLYC motCORR – STED WHITE. L'échantillon a été fourni par David Unnersjö-Jess, KTH, Stockholm, Suède.

Vous envisagez de travailler avec l'imagerie STED ?

Sachez qu'il n'est pas nécessaire d'investir dans un instrument spécifique pour examiner les détails du vivant. Les nouveaux nanoscopes Leica TCS SP8 STED ONE 592 et STED ONE 660 constituent votre point d'entrée stratégique dans la nanoscopie basée sur la plateforme confocale extrêmement innovante et polyvalente Leica TCS SP8. La détection spectrale associée à la sensibilité des détecteurs hybrides Leica HyD et la marge de manœuvre offerte par le laser à lumière blanche en matière d'excitation font du nanoscope STED de Leica Microsystems un outil d'une flexibilité maximale dont les applications dépassent le cadre même de la nanoscopie.

Si vous souhaitez bénéficier d'un accès au maximum de fluorophores et de couleurs possibles, le Leica TCS SP8 STED 3X vous permet d'utiliser jusqu'à trois lignes STED facilitant l’imagerie STED sur l'ensemble du spectre visible.

Des technologies qui renforcent votre domaine scientifique

  • La nanoscopie réglable et directe en x,y et z révèle les moindres détails
  • Les objectifs STED WHITE offrent une correction optimale des couleurs sur l'ensemble du spectre
  • Objectif motCORR STED pour l'imagerie Live profonde
  • Plusieurs lignes STED permettent de couvrir le spectre complet de la lumière visible
  • La détection déclenchée par porte temporelle améliore la résolution et augmente les capacités des cellules vivantes
  • L'alignement automatique du faisceau fournit stabilité et fiabilité
  • L'assistant Smart STED commande vos expériences de façon intuitive
  • La déconvolution Huygens maximise encore davantage vos données brutes
  • Le concept modulaire basé sur le TCS SP8 permet de procéder à une mise à niveau à tout moment

"STED 3X a réalisé un énorme bond en avant en se développant dans de nouveaux domaines – l'imagerie à super-résolution multicolore va sûrement révolutionner la biologie cellulaire."

Dr. Yasushi Okada, Centre de biologie quantitative RIKEN, Osaka, Japon

Les prix "R&D 100 Award 2014" et "Scientist Top 10 Innovations Award 2014" reconnaissent le Leica TCS SP8 STED 3X parmi les produits de haute technologie les plus importants lancés en 2014.
Image STED d'une triple immunocoloration dans des cellules HeLa : vert : NUP153-Alexa 532, rouge : Clathrin-TMR, blanc : Actin-Alexa 488.

Nanoscopie multicolore

Couvrez l'ensemble du spectre de lumière visible

Les applications multicolores permettent d'accéder à des informations détaillées sur les interactions entre les différentes structures. Les examens de colocalisation s'exécutent de façon systématique avec le nanoscope STED ONE. Les lignes laser STED du STED 3X  à 592 nm et 660 nm et le laser pulsé à 775 nm, qui atteint des résolutions inférieures à 30 nm, couvrent l'ensemble du spectre de lumière visible et permettent d'accéder à de nombreux fluorophores applicables.

Parce qu'un nombre plus important de couleurs crée la différence !

Le laser à lumière blanche, l'AOBS (répartiteur acoustico-optique) et le détecteur spectral réglable agissent en synergie pour vous permettre de représenter tout type de combinaison de fluorophores et de bénéficier de la flexibilité maximale pour votre expérience multicolore.

"Voir les détails essentiels, voilà ce que signifie pour moi le système STED !"

Prof. Stephan Sigrist, Université libre de Berlin (FU), Allemagne

La nanoscopie appuyée par des optiques à la pointe de la technologie

STED WHITE – refusez tout compromis en matière d'optique

Quand il s'agit de représenter les plus petits détails de la façon la plus nette qui soit, il est essentiel de commencer par utiliser des optiques d'excellente qualité. La correction chromatique exceptionnelle des deux objectifs STED WHITE assure un recouvrement optimal de l'excitation optimal et de la PSF STED en z sur toute la plage du spectre visible. Il est possible d'utiliser le laser à lumière blanche comme source d'excitation pour la STED à 592/660/775. Vous aurez la liberté totale de choisir parmi un nombre de fluorophores plus élevé que jamais pour la nanoscopie STED.

Objectif STED pour la nanoscopie des cellules vivantes

L'objectif à immersion dans l'huile STED WHITE (HC PL APO 100x/1.40 OIL) permet une représentation aisée des échantillons de référence fixes. Il fournit l'ouverture numérique maximale et une excellente résolution. Pour les expériences plus complexes, le nouvel objectif à immersion dans la glycérine STED WHITE (HC PL APO 93X/1.30 GLYC motCORR) repousse le champ des possibles. La bague correctrice motorisée permet un réglage précis et rapide des lentilles optiques pour les diverses épaisseurs de lamelles couvre-objet, les variations de température et les échantillons non homogènes. Lumière éclairant les détails profonds de votre échantillon avec la STED 3D non seulement à température ambiante, mais aussi à 37 °C.

"The lens is a must, everybody should have it!" - Dr. Yasushi Okada, Centre de biologie quantitative RIKEN, Osaka, Japon

"The new 93x STED objective with glycerol immersion opens up a new range of applications that are important for biological imaging." - Timo Zimmermann

Aberration chromatique des objectifs STED WHITE. Profondeur de champ représentée respectivement par des tirets gris et une ligne continue.

Gated STED - votre passerelle vers la nanoscopie de cellules vivantes

Imagerie de cellules vivantes : vésicules à noyau dense étiquetées ANF GFP se déplaçant le long d'axones à env. 10 μm de profondeur dans une larve de drosophile anesthésiée intacte. Une image confocale et une image STED ont été enregistrées toutes les 0,45 secondes. Vidéo ci-dessus : suivi de particule exécuté par TrackMate (Fiji).

gSTED - davantage d'images contenant plus de détails

Gated STED accroît considérablement la fonctionnalité éprouvée du STED CW, ce qui vous permet de choisir entre une résolution plus élevée ou une puissance laser inférieure.

Ce système permet d'acquérir davantage d'images et de révéler de plus petits détails.

"En effet, parmi toutes les modalités STED rapportées jusqu'à présent, le g-STED délivre les images les plus nettes avec la puissance de crête la plus faible."

Vicidomini et al., Nature Methods 2011

Cellule T vivante en suspension. Reconstruction 3D de piles confocales et STED. Projection maximale. Avec l'aimable autorisation de Marco Fritsche, Mathias Clausen et Christian Eggeling, MRC Human Immunology Unit, Weatherall Institute of Molecular Medicine, Université d'Oxford, Royaume-Uni.

Résolution inférieure à 50 nm avec HyD et laser blanc

Les détecteurs hybrides Leica HyD associés au laser blanc en tant que source d'excitation pulsée permettent de détecter les signaux à limiter à une porte temporelle spécifique après l'impulsion d'excitation. En détournant la porte temporelle de l'impulsion d'excitation, l'on peut obtenir une résolution bien en deçà de 50 nm. Avec la même puissance laser, la gated STED atteint une résolution 50 % plus élevée que la STED CW. Il est possible d'observer de plus petits détails sans qu'il soit nécessaire d'appliquer davantage de lumière STED, ce qui permet d'accroître les capacités des cellules vivantes.

Distribution de durée de vie des fluorophores dans le point focal effectif d'un microscope STED CW. Les états durables (en rouge) sont situés au centre tandis que les états à courte durée (en bleu) sont situés en périphérie.

STED dans la 3e dimension

Plusieurs trajets optiques STED

Avec TCS SP8 STED 3X et TCS SP8 STED ONE, deux trajets optiques sont disponibles sur l'instrument et génèrent ainsi différents modèles de STED. La lumière STED peut être distribuée en continu entre les deux trajets.

Concevez votre propre PSF

Vous pouvez choisir entre la meilleure résolution latérale, la meilleure résolution verticale ou toute autre résolution située entre les deux résolutions mentionnées pour obtenir des résultats optimaux. Des sections optiques extrêmement fines révèlent des détails inconnus. Les STED 3X et STED ONE vous permettent d'adapter la résolution de votre microscope à votre situation et à vos échantillons, et ce dans toutes les dimensions.

"L'ajout de la troisième dimension et d'une ligne STED supplémentaire à l'imagerie STED nous permet de voir des choses qu'il était impossible de voir auparavant."

Dr. Timo Zimmermann, Centre de régulation génomique, Barcelone, Espagne

Reconstruction d'une surface en 3D après une déconvolution Huygens de la pile z (91 plans). Les données STED (en vert) indiquent une augmentation distincte de la résolution latérale quand la technique STED est utilisée pour maximiser la résolution en xy (zone verte au fond) ou dans toutes les dimensions (zone verte au premier plan) par rapport au résultat confocal (en rouge). La meilleure représentation de la structure observée est clairement obtenue par le STED 3D.

Sélectionnez votre résolution

Amélioration de la résolution permise par l'attribution de la lumière aux deux trajets optiques STED : la meilleure résolution latérale est obtenue par le vortex donut classique, la meilleure résolution verticale par le nouveau z donut. Elle peut aussi être optimisée pour le plus petit volume focal.

Des solutions logicielles pour le STED – familiarisez-vous avec votre résolution

La microscopie STED est un moyen rapide et direct de parvenir à la super-résolution. Le logiciel LAS X vous permet de bénéficier d'une grande facilité d'utilisation. Une esquisse de la PSF effective estimée vous fournit un retour visuel en ligne direct sur les effets des paramètres techniques que vous avez choisis.

Des processus intuitifs

L'assistant Smart STED vous permet de commander l'instrument par trois glissières. Vous vous appuyez sur la PSF effective pour définir le niveau général de super-résolution requis. Pour des résultats optimaux, l'assistant ajuste tous les réglages nécessaires, tels que l'intensité laser STED, la taille des pixels, la taille du pas z, le sténopé, les réglages de la porte temporelle et l'établissement de la moyenne.

La puissance de la déconvolution Huygens STED

Avec chaque système TCS SP8 STED 3X, vous disposez d'un kit de déconvolution Huygens STED développé par SVI. Huygens accroît considérablement le contraste et améliore ainsi la résolution en x, y et z. Le résultat peut être comparé immédiatement avec les données brutes. Il n'y a aucun risque d'être induit en erreur par les artefacts du traitement d'images.

"La possibilité d'utiliser la technique STED en 3D nous permettra de passer à un niveau supérieur qui correspond exactement aux besoins des chercheurs."

Dr. Christian Eggeling, Université d'Oxford, Royaume-Uni

Processus Smart STED : 1. Ajustez la PSF effectif souhaitée au moyen de la glissière STED et 3D. 2. À l'aide de la glissière de dosage, choisissez entre le rapport signal-bruit et le nombre d'images. 3. Définissez la région d'intérêt pendant un balayage confocal en temps réel et ajuster l'excitation en conséquence. 4. Collectez vos données de super-résolution en capturant une image ou en démarrant une série.