Les mesures de la FCS sont effectuées avec le système Leica TCS SP8 SMD.

Le FCS peut être effectué à l'aide d'un faisceau laser continu. L'utilisation de faisceaux laser à impulsions permet même des possibilités d'analyse sophistiquées, telles que le FCS limité dans le temps ou encore la durée de vie de la fluorescence FCS (FLCS). Les deux méthodes utilisent les informations complémentaires obtenues par la mesure simultanée de la durée de vie de la fluorescence.

Une limite dans le temps, par exemple, sélectionne pour analyse uniquement les photons pouvant être clairement attribués au déclin de la fluorescence. La suppression de la dispersion de lumière (Rayleigh, Raman) à partir du signal de détection permet une mesure précise de la concentration.

1. Suppression des artéfacts de détecteur par durée du filtrage (FLCS)

Dans le FLCS, chaque photon est statistiquement pondéré en fonction de sa contribution à l'analyse de données FCS. Il peut être utilisé afin de corriger les artéfacts du détecteur ou les contributions de diffusion.

Il permet même une surveillance simultanée de deux colorants avec un spectre d'émission pouvant se chevaucher complètement et avec des coefficients de diffusion similaires, à l'aide d'un unique détecteur.

Échantillon GalNacT2-GFP exprimé en cellules HeLa analysées avec le FLCS. Avec nos remerciements au Dr Matthias Weiss, Dr Jedrzej Szymanski et Nina Malchus, DKFZ, Heidelberg.

2. Mesure in vivo

4. Comparaison d'une courbe FCS (aucun filtre temporel) avec la courbe FLCS (après le filtrage)

3a Adapter la dégradation de la durée de vie