FCS

형광측정법으로 형광 분자가 집중, 고정된 레이저 빔을 통과하며 여기(exited)되어 형광 방출합니다. 공초점 핀홀을 통과한 후, 방출된 민감한 디텍터에 의해 포착됩니다.

FCS 측정은 Leica TCS SMD FCS 시스템으로 작동됩니다.  


자기상관 (autocorrelation) 곡선 바탕의 수량 매개 변수

이동 입자로 인해 강도가 변하게 됩니다. 이러한 자기상관를 이용해 분자 규모에 대한 정보를 얻을 수 있습니다.  상관곡선의 각거리는 입자수를 나타내고, 변곡점 시간은 입자 이동성을 보여줍니다. 끝으로 곡선의 기울기 및 모양은 방출 형태를 반영합니다. 입자 농도, 질량, 점도경계 균열(bound fraction) 등의 정보를 이들 매개 변수로부터 얻을 수 있습니다. 

FCS 데이터 획득 및 분석 원칙

  1. 고정 관심점(fixed point of interest, beam parking)에서 레이저 조명은 형광입자를 여기(exicitation) 공간에서 여기시킨다. 공초점 공간 내·외부 입자 이동은 강도의 변동을 야기.    
  2. 단일 광자 카운팅 모드를 활용하여 강도 변동을 측정.
  3. 상관 기능을 계산.
  4. 적합한 생물물리모델을 상관 곡선에 피팅. 관심 매개 변수 측정:
  • 입자 농도
  • 방출 계수
  • 점도
  • 분자 밀도
  • 결합 상수
  • 광물리적 성질

     

1. Laser illumination at a fixed point of interest (beam parking) excites fluorescent particles in the excitation volume. The particle movement in and out of the confocal volume causes intensity fluctuations.
3. Calculation of the correlation function<br>4. Fitting of the corresponding biophysical model
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