FLCS 측정은 Leica TCS SMD FLCS 시스템으로 수행됩니다.

필수적으로, FCS는 지속파 레이저로 수행될 수 있습니다. 펄스 레이저의 사용은 time-gated FCS 또는 Fluorescence Lifetime FCS (FLCS) 같은 훨씬 더 복잡한 분석을 가능하게 합니다. 두 방법 모두 형광 수명의 동시 측정으로 얻어진 추가 정보를 이용합니다.

예를 들어, 타임게이트(time-gate)는 형광 감쇠에 분명하게 기여할 수 있는 그러한 광자만을 분석하기 위해 선택됩니다. 검출된 신호로부터 산란된 빛의 억제(Rayleigh, Raman)는 정확한 농도 측정을 가능하게 합니다.  

1. Removal of detector artifacts by lifetime filtering (FLCS)

FLCS에서 각 광자는 FCS 데이터 분석에 얼마나 많이 기여하는지에 대해 통계학적으로 중량이 측정됩니다. 이는 검출기 인공음영(detector artifacts) 또는 산란 기여를 교정하는데 이용될 수 있습니다.

심지어 단일 검출기를 이용하여 완벽한 오버래핑 방출 스펙트럼과 매우 비슷한 확산계수로 두 염료를 동시에 모니터링 할 수 있습니다.  

시료: FLCS으로 분석된 HeLa 세포에서 발현된 GalNacT2-GFP. Dr. Matthias Weiss, Dr. Jedrzej Szymanski 및 Nina Malchus, DKFZ, Heidelberg에게 감사드립니다.

2. Measurement <i>in vivo</i>

4. Comparison of FCS curve (no time filter) with FLCS curve (after time filtering)

3a. Fitting lifetime decay
3b. Computation of time filter pattern