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Leica TCS SP8 STED

Nanoscopia profunda de 45-65 µm dentro de uma amostra clarificada de rim adulto. Imagem 20 µm xyz STED 3D/ Confocal. Nefrina visualizada com STAR 635P. Clarificação por protocolo CLARITY modificado. Lentes STED: HC PL APO 93X/1.30 GLYC motCORR – STED WHITE. Amostra em cortesia de David Unnersjö-Jess, KTH, Estocolmo, Suécia.

Gostaria de começar com a captação de imagem STED?

Não há necessidade de investir em um instrumento específico para observar os detalhes da vida. Os novos nanoscópios Leica TCS SP8 STED ONE 592 e STED ONE 660 são a sua entrada estratégica no mundo da nanoscopia com base na inovadora e versátil plataforma confocal Leica TCS SP8. A detecção espectral em combinação com a sensibilidade dos detectores híbridos Leica HyD e a liberdade de excitação oferecida pelo White Light Laser fazem do nanoscópio STED da Leica Microsystems uma ferramenta de flexibilidade máxima não apenas para a nanoscopia.

Se você precisar de acesso ao maior número possível de fluoróforos e cores, o Leica TCS SP8 STED 3X permite que você use até três linhas STED, facilitando a captação de imagens STED em todo o espectro visível.

Tecnologias que fortalecem sua ciência

  • A nanoscopia ajustável e direta em x,y e z revela os menores detalhes
  • As objetivas STED WHITE oferecem a correção ideal das cores para todo o espectro
  • Objetiva motCORR STED para captação de imagem profundamente em células vivas
  • Múltiplas linhas STED dão acesso ao espectro total da luz visível
  • Detecção gated melhora a resolução e aumenta a capacidade para imagens de células vivas
  • O auto alinhamento de feixe proporciona estabilidade e confiabilidade
  • O Assistente Smart STED controla seus experimentos de modo intuitivo
  • A deconvolução Huygens obtém ainda mais de seus dados brutos
  • Conceito modular com base no TCS SP8 permite atualizações a qualquer momento

"O STED 3X deu um salto quântico, expandindo para novas dimensões - a captação de imagem de super resolução multicores de uma célula certamente irá revolucionar a biologia celular."

Dr. Yasushi Okada, Centro de biologia quantitativa RIKEN, Osaka, Japão

As premiações “R&D 100 Award 2014” e o “Scientist Top 10 Innovations Award 2014” reconhecem o Leica TCS SP8 STED 3X dentre os produtos mais importantes de alta tecnologia introduzidos em 2014.
Imagem STED de imunofluorescência tripla em células HeLa: Verde: NUP153-Alexa 532, vermelho Clatrina-TMR, branco: Actina-Alexa 488.

Nanoscopia multicores

Cubra todo o espectro da luz visível

As aplicações multicores fornecem acesso às informações detalhadas sobre as interrelações das diversas estruturas. Os estudos de colocalização são realizados rotineiramente com o nanoscópio STED ONE. As múltiplas linhas STED a laser do STED 3X em 592 nm e 660 nm e o laser pulsado a 775 nm, que atinge resoluções abaixo de 30 nm, abrangem todo o espectro da luz visível e fornecem acesso aos diversos fluoróforos aplicáveis.

Mais cores fazem a diferença!

O White Light Laser, o AOBS (Acousto Optical Beam Splitter) e o detector espectral ajustável permitem a captação sinérgica de imagens de qualquer tipo de combinação de fluoróforo e oferecem a mais alta flexibilidade para seu experimento multicores.

"O que STED significa para mim: Ver os detalhes essenciais!"

Prof. Stephan Sigrist, FU Berlim, Alemanha

Nanoscopia energizada por ótica de última geração

STED WHITE – não comprometa a ótica

Quando se trata de resolver mínimos detalhes, é crucial começar com as melhores ópticas. A excelente correção cromática das duas objetivas STED WHITE garante uma sobreposição ideal de excitação e PSF STED em z em toda a gama espectral visível. É possível usar o laser de luz branca como fonte de excitação para STED em 592/660/775 nm. Aproveite a liberdade de escolher entre uma grande quantidade de fluoróforos para a nanoscopia STED.

Objetiva STED para nanoscopia de células vivas

As amostras fixadas padrão são facilmente captadas com a objetiva de óleo STED WHITE (HC PL APO 100x/OIL 1.40). Ela proporciona a mais alta abertura numérica (NA) e a melhor resolução. Para experimentos mais complexos, a nova objetiva de glicerina STED WHITE Glycerin (HC PL APO 93X/1.30 GLYC motCORR) cria novas oportunidades. O colar de correção motorizado permite o ajuste preciso e rápido das lentes óticas à espessura da lamínula, às mudanças na temperatura e não homogeneidade da amostra. Ilumine os detalhes no interior de sua amostra com 3D STED não só à temperatura ambiente, mas também a 37°C.

"The lens is a must, everybody should have it!" - Dr. Yasushi Okada, Centro de biologia quantitativa RIKEN, Osaka, Japão Center, Osaka, Japan

"The new 93x STED objective with glycerol immersion opens up a new range of applications that are important for biological imaging." - Timo Zimmermann

Aberração cromática das objetivas STED WHITE. Profundidade de campo representada em linhas tracejadas e sólidas, respectivamente.

Gated STED - sua porta para a nanoscopia de células vivas

Captação de imagens de células vivas: vesículas de núcleo denso marcadas por ANF GFP movendo-se ao longo de axônios de cerca de 10 μm de profundidade de uma larva drosófila intacta anestesiada. Uma imagem confocal e uma imagem STED foram registradas a cada 0,45 segundos. Filme acima: Monitoramento de partícula realizado por TrackMate (Fiji).

gSTED - mais imagens com detalhes menores

Gated STED amplia substancialmente a funcionalidade do comprovado STED CW, dando a você a opção de resolução maior ou do uso de uma menor potência de laser.

Mais imagens são obtidas e mais detalhes são revelados.

"Na verdade, de todas as modalidades STED relatadas até agora, o g-STED fornece as imagens mais nítidas com o menor uso de energia."

Vicidomini et al., Nature Methods 2011

Célula T viva em suspensão. Reconstrução 3D de imagens STED e confocais. Projeção máxima. Cortesia de Marco Fritsche, Mathias Clausen e Christian Eggeling, MRC Human Immunology Unit, Weatherall Institute of Molecular Medicine, Universidade de Oxford, Reino Unido.

Resolução abaixo de 50 nm com HyD e Laser de luz branca

Os detectores híbridos Leica HyD, juntamente com o Laser de luz branca como fonte de excitação pulsada, permitem que a detecção de sinais seja limitada a um determinado intervalo de tempo após o pulso de excitação. Deslocando a porta de tempo para longe do impulso de excitação, uma resolução muito abaixo de 50 nm pode ser alcançada. Com a mesma potência do laser, o gated STED atinge uma resolução mais de 50% maior que STED CW. Os detalhes menores podem ser observados sem a necessidade de aplicar mais luz STED, aumentando a capacidade para imagens de células vivas.

Distribuição do tempo da vida de fluoróforos no ponto focal efetivo de um microscópio STED CW. Os estados de vida longa (vermelho) estão localizados no centro, enquanto os de vida curta (azul) estão na periferia.

STED na 3ª dimensão

Múltiplos caminhos de luz STED

Com TCS SP8 STED 3X e TCS SP8 STED ONE, há dois caminhos de luz disponíveis no aparelho, que gera diferentes padrões STED. A luz STED pode ser distribuída gradualmente entre os dois caminhos.

Modele seu PSF

Você pode escolher entre a melhor resolução lateral, a melhor resolução vertical ou qualquer estado entre as duas para obter ótimos resultados. As seções óticas ultrafinas revelam detalhes desconhecidos. STED 3X e STED ONE permitem que você combine a resolução de seu microscópio em todas as dimensões para atender suas demandas e amostras.

"A adição da terceira dimensão e uma linha STED adicional na captação de imagens STED nos permite ver coisas que antes eram impossíveis."

Dr. Timo Zimmermann, Centro de Regulação Genômica, Barcelona, Espanha 

Reconstrução de superfície 3D após deconvolução Huygens de conjunto z (91 planos). Os dados STED (verde) mostram um claro aumento de resolução lateral quando o STED é usado para maximizar a resolução em xy (setor verde no fundo) ou em todas as dimensões (setor verde na frente) comparado com o resultado confocal (vermelho). Claramente a melhor representação da estrutura observada é obtida pelo 3D STED.

Selecione sua resolução

Melhorias de resolução através da alocação da luz para os dois caminhos STED: a melhor resolução lateral é alcançada pelo clássico donut em vortex, a melhor resolução vertical pelo novo donut z. Eles também podem ser otimizados para alcançar o menor volume focal.

Soluções de software para STED – conheça sua resolução

O microscópio STED é o caminho rápido e direto para a super resolução. O LAS X oferece a melhor conveniência possível. Um esboço do PSF efetivo estimado fornece o feedback visual direto e on-line sobre os efeitos de seus parâmetros técnicos escolhidos.

Fluxo de trabalho intuitivo

O assistente Smart STED permite que você controle o aparelho com três sliders simples. Com a ajuda do esboço do PSF efetivo, você define o nível geral de super resolução necessário. Para obter os resultados ideais, o assistente ajusta todas as configurações necessárias, como intensidade do laser STED, tamanho do pixel, tamanho do passo z, configurações de gating, pinhole e médias de aquisição.

Deconvolução Huygens STED poderosa

Com o sistema TCS SP8 STED 3X, você obtém com exclusividade um poderoso pacote de deconvolução Huygens STED da SVI. O Huygens aumenta drasticamente o contraste, além de melhorar a resolução em x, y e z. O resultado pode ser comparado diretamente com os dados brutos. Não há risco de ser enganado por artefatos de processamento de imagem.

"A capacidade de fazer STED em 3D elevará nossa pesquisa para um nível superior – direto no ponto das necessidades do pesquisador."

Dr. Christian Eggeling, Universidade de Oxford, Reino Unido

Fluxo de trabalho Smart STED: 1. Ajuste o PSF efetivo desejado com o STED e o slider 3D. 2. Escolha entre sinal para ruído e número de imagens com o slider de dosagem. 3. Defina a área de interesse durante uma varredura confocal ao vivo e ajuste a excitação corretamente. 4. Colete seus dados de super resolução capturando uma imagem ou iniciando uma série.