Entre em contato conosco

As medições de FLCS são realizadas com o sistema Leica TCS SP8 SMD.

Essencialmente, a FCS pode ser realizada com um laser de onda contínua. O uso de lasers pulsados possibilita análises ainda mais sofisticadas, como FCS de tempo fechado ou FCS do tempo de vida de fluorescência (FLCS). Ambos os métodos utilizam as informações adicionais obtidas pela medição simultânea do tempo de vida de fluorescência.

Um portal de tempo, por exemplo, seleciona para análise apenas os fótons que podem ser claramente atribuídos ao decaimento da fluorescência. A supressão de luz dispersa (Rayleigh, Raman) dos sinais detectados permite uma medição precisa da concentração.

Em FLCS, a contribuição de cada fóton para a análise dos dados FCS é estatisticamente ponderada. Isso pode ser usado para correção de artefatos do detector ou contribuições de dispersão.

Permite ainda o monitoramento simultâneo de dois corantes com espectros de emissão completamente sobrepostos e com coeficientes de difusão muito semelhantes usando apenas um único detector.

Amostra: GalNacT2-GFP expresso em células HeLa analisadas com FLCS. Nossos agradecimentos ao Dr. Matthias Weiss, Dr. Jedrzej Szymanski e Nina Malchus, DKFZ, Heidelberg.

4. Comparação da curva FCS (sem filtro de tempo) com a curva FLCS (após filtragem de tempo)