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SP8 DIVE Leica Leica Microsystems
使用配备 4Tune 光谱检测器的 SP8 DIVE 拍摄的 Confetti 小鼠小肠多色图像。细胞谱系示踪。蓝绿色:CFP;绿色:GFP;黄色:YFP;红色:RFP。直肠癌研究。样本来源:Jacco van Rheenen,荷兰·乌得勒支大学

享受4Tune带来的光谱自由

转基因标记的数量持续、快速发展。SP8 DIVE 可不断适应这些发展,只需点击几次鼠标,就能匹配现有和新的各种转基因标记物。

全新突破性4Tune NDD 技术,为您实现光谱自由。可调节4Tune检测系统接收全发射光谱,亦可分离严重串色的光谱而无需通过数学计算。

SP8 DIVE 使您能够捕获双倍的荧光信号,进而优化穿透深度、成像速度及降低体内成像的光毒性。

“ 传统的二向色镜绝非区分所有荧光基团的最优之选。如今,通过光谱检测器,这项任务变得易如反掌,因为我们能够真正地优化您想要检测的每个荧光基团的波长。”

荷兰乌得勒支大学,Jacco van Rheenen 教授

Alberto Diaspro

意大利热那亚技术研究院 (IIT)

“今天在此进一步宣传多光子显微术,我深感荣幸。在扩大应用范围以及与各种样品相关的诸多问题解决方案方面,它是一个很大的飞跃。值得一提的是,SHG 和双光子图像实现了有效集成。

我认为,这个架构与其他徕卡解决方案和产品 (包括 STED 模块) 相结合的可能性,将使其能够针对从空间到时间分辨率、再到未来的荧光团和方法等不同实验需求进行调节。 

后焦平面可以扩大或缩小双光子激发照明光束,能够控制并看见后焦平面的填充,我非常满意,这太棒了。”

Sophie Allart

研究工程师
法国国家健康与医学研究院图卢兹普尔潘生理病理学中心

“它的神奇之处在于其功能采用模块化设计,因为在 NDD 检测器前部使用荧光滤块会影响对荧光染料的选择,而且有时我们不得不调整样品制备和更换荧光染料,现在这些都简单了许多。

我心服口服,我使用双光子迄今 10 年了,四种颜色是多么有意思啊!”

Kees Jalink

荷兰癌症研究所

“我刚看了演示版,它太让人惊艳了。这真了不起,现在,徕卡让红外光也做到了可见光能做到的事,实在是非常出色!

Ron Hoebe

阿姆斯特丹大学范列文虎克高级显微技术中心 (LCAM)

“我喜欢新的双光子光谱检测器。我最喜欢的是它嵌入软件的方式。

我管理着一个成像中心,对用户来说越简单越好。我们有 200 多个用户,培训他们使用非常复杂的机器极其耗时。
所以越简单越直观越好。”

Ammasi Periasami

 

弗吉尼亚州 W.M. Keck 细胞成像中心

“我喜欢从 740 至 920 的波长设置范围。这是一个很好的使用选项。我的意思是,需要使用的波长范围取决于荧光团。是的,如果使用一个波长,然后使用两个或三个检测器来处理和调节,会有很多选择。

信噪比非常好,发射信号检测很灵活。

毫无疑问,系统的用户友好性非常重要,我需要的就是这个。自从使用徕卡产品工作以来,我一直在关注双光子操作相对于单光子操作的用户友好性。”

[在 Focus on Microscopy 2017 会议上进行该演示期间,配备一个红外激光和两个光谱 HyD-NDD 检测器的 SP8 DIVE 按顺序采集了 4 个标签数据。740 nm 激发光 (Alexa Fluor 350 用于杯状细胞粘液,Sytox Green 用于细胞核) 920 nm 激发光 (SHG 用于胶原蛋白,Alexa Fluor 568 鬼笔环肽用于 F-Actin)。] 

Marc van Zandvoort

荷兰马斯特里赫特大学遗传学和细胞生物学系

“现有的双光子系统非常好的扩展。这一扩展使在使用双光子直接检测器时更加灵活。

到目前为止,直接检测器需要单独的滤片,这种用法很受限制。从这个角度来看,这个扩展非常棒。”

Urs Ziegler

苏黎世大学显微和图像分析中心设备主管

“它非常灵活,使用很简单。不需要手动更换滤片,想用什么染料都可以。已经了解共焦扫描显微技术的人使用这个软件时,基本上不需要培训,我对这一点非常欣赏。不需要手动更换滤片 – DIVE 使用简单,因为它能妥善处理不同的滤片和染料组合,真正做到这一点并不容易。所以这已经是一个巨大的优势。

很明显,在活体组织成像时您有各种染料可以使用,包括二次和三次谐波。使用 SP8 DIVE 做到这一点非常、非常地简单。我认为这是一大进步。”

轻松 DIVE – 4Tune光谱式检测系统

4Tune NDD检测系统可配备 2 至 4 个检测单元,可自由选配混合检测器 (HyD)、光电倍增器 (PMT),或二者同用。发射光在可变分光镜和可变带通滤片的共同作用下分离。波长调节范围为 380 至 800 nm。

在软件操作界面用户只需进行拖放操作4Tune,即可优化多个转基因标记的发射光设置。清晰直观的设计使其操作简单,培训要求极低。

无论是针对任何现有和最新研发的转基因标记,还是为未来新发展进行印证,SP8 DIVE 都将是您的科研利器!

Top graph: Rapid increase of markers
Bottom: 4Tune user interface
小鼠腿部。肌肉纤维以 Rab5-GFP 进行标记。IRAPO 40x 1.1。左:最佳分辨率。右:深度穿透。
使用深度穿透设置大约可使亮度提高一倍,从而增大穿透深度。样品特别感谢:曼海姆大学应用科学系 Rudolf 教授。

探索新深度

借助 SP8 DIVE,您可以进行优化调节,进行最深度的探索,观察最细微的结构。新型 Vario Beam Expander (VBE,可调光束扩展器)可优化调整每个物镜的照明光束直径。

VBE 能够保证实现最优共定位,您可根据研究需求,对分辨率和成像深度进行调节。

使用 Vario Beam Expander 优化深度和分辨率

Leica Vario Beam Expander (VBE) 兼有可调光束直径和可调光束发散度。运用这项技术,您可以实现最大深度、最佳分辨率和全色差校正。

可调光束直径,实现分辨率和深度的最佳平衡 (上图)

通过调节光束直径,您可以调节分辨率和能量输入之间的最佳平衡。调宽光束后,可实现后焦平面的均匀照明。结合物镜的高数值孔径,可达到最大分辨率。

调窄光束将使更多能量进入聚焦容积,从而更好地穿透样品、加深成像深度。利用VBE,您可以独立调节多达4根红外波长,以达到分辨率和深度的最佳平衡。

可调光束发散度实现全色差校正 (下图)

引入光束发散度调节,可校正不同红外波长的Z轴色差,从而实现多达4条红外波长的同一焦点激发。

Tunable Vario Beam Expander (VBE)
小鼠胫骨。横纹肌。神经肌肉接点发育的形态学分析。绿色:GFP – Rab 5 (GTPase,内涵体)。红色:mCherry – Bif 1。灰色:AF647- α 金环蛇毒素 (NMJ)。样品特别感谢:曼海姆大学应用科学系 Rudolf 教授。

可重复的多色体内深度成像

多色激发

在同一个实验中同时激发多个转基因标记物仍可获得完美的颜色分离。亦可在衍射极限的激发容积内同时进行高精度的定点光刺激和成像。通过声光调制器(Acousto optical modulation,AOM),SP8 DIVE可同时配置多达三根可调激发谱线。
由于激光可调至 1300 nm,您甚至可以使用红色甚至深红染料进行多光子实验。这样光散射会越少,穿透会越深,并产生更明亮的图像,全面展现深层的细微结构。

TuneIR – 稳定理想的仪器条件成就决定性的探索结果


为了随时获得始终准确的实验结果,确保仪器和红外光束的条件稳定至关重要。为此,我们为 VBE配备了新颖的光束追踪器。

我们确保,您可为多达三条可调激发谱线获得可重复的完美成像条件,并可对多个标记实现完美共定位。


DIVE – a member of the SP8 platform

The SP8 DIVE is the latest addition to the established SP8 platform from Leica. The platform can be configured to accommodate different research methods ranging from confocal microscopy with Super-Resolution to STED Nanoscopy.

For users, this delivers both versatility and investment protection.

All instruments of the SP8 platform are open and adaptable to the user’s research, both now and in the future.

top: Versatile platform SP8 (left), Nanoscopy (middle), Super-Resolution (right)
bottom: CARS (left), Light Sheet (middle), SMD (right)