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Leica TCS SP8 STED Confocal Microscopes Super-Resolution Microscopes Leica Leica Microsystems
成人肾脏样品体表下 45-65 µm 深处的纳米显微成像。20 µm xyz共聚焦/3D STED。STAR 635P 标记肾病蛋白。样品经修改的 CLARITY 程序进行透明化处理。STED 物镜:HC PL APO 93X/1.30 GLYC motCORR – STED WHITE。样品特别感谢:瑞典斯德哥尔摩皇家工学院 (KTH),David Unnersjö-Jess。

您想要从 STED 成像开始您的工作?

无需投资购买专用仪器,即刻亲见生命的奥秘。新型 Leica TCS SP8 STED ONE 592 和 STED ONE 660 纳米显微镜以多功能创新共聚焦平台 Leica TCS SP8 为基础,是纳米显微技术的战略性入门设备。Leica HyD 混合检测器将光谱检测和灵敏度相结合,并辅以白光激光的自由激发,使 Leica Microsystems 的 STED 纳米显微镜成为一种灵活的工具,适用领域绝不仅止于纳米显微技术。

如果您需要尽可能多地进行多荧光团多颜色成像,Leica TCS SP8 STED 3X 允许您使用多达三条 STED 谱线,在整个可见光全光谱内进行STED成像。

增强科研实力的技术

  • 纳米显微技术可直接运用于 x、y 和 z 轴,并且可调,为您揭示细微的结构
  • STED WHITE 物镜提供全光谱范围的色差校正
  • motCORR STED 物镜实现深度实时图像
  • 多条 STED 谱线支持全可见光全光谱超高分辨率成像
  • 门控检测提高分辨率,改善活细胞成像性能
  • 自动光束校准,确保稳定性和可靠性
  • Huygens 反卷积技术,从原始数据中获取更多信息
  • 基于 TCS SP8 的模块化概念,随时升级

“STED 3X 迈出了巨大的飞跃,开拓了全新的方向 – 细胞多色超高分辨率成像无疑将为细胞生物学带来革命性的变化。”

日本大阪理化学研究所定量生物学中心,Yasushi Okada 博士

Leica TCS SP8 STED 3X 在 2014 年最重要的高科技产品中脱颖而出,荣获“2014 年度研发百项大奖”和“《Scientist》杂志 2014 年度 10 大创新奖”。
HeLa 细胞三重免疫染色 STED 图像:绿色:NUP153-Alexa 532,红色:网格蛋白-TMR,白色:肌动蛋白-Alexa 488。

多色纳米显微技术

涵盖可见光全光谱

多色标记的应用使我们对各种结构的相互关系有了更深入的了解。共定位研究通常使用 STED ONE 纳米显微镜来完成。STED 3X 的多条 592 nm 和 660 nm STED 激光谱线以及 775 nm 脉冲激光 (分辨率可达 30 nm) 涵盖可见光全光谱,可以获取许多适用的荧光团。

更多颜色,成就与众不同!

白光激光、AOBS (声光分光器) 和可调光谱检测器结合在一起,使您可对任何荧光团组合成像,极度灵活地执行多色实验。

“对我来说,STED 意味着:看见关键的细节!”

德国柏林自由大学 (FU Berlin),Stephan Sigrist 教授

尖端光学器件成就的纳米显微技术

STED WHITE – 丝毫无损光学器件品质

如果需要解析微小的细节,优质的光学器件是首要的关键前提。三个 STED WHITE 物镜色彩校正性能良好,可确保在整个可见光谱范围内实现理想激发覆盖和 z 轴 STED PSF。可在592/660/775STED使用白激光作为 激发光。随心所欲地为 STED 纳米显微技术自由选择比以往更多的荧光团。

STED WHITE物镜深活纳米细胞

使用 STED WHITE 油浸物镜 (HC PL APO 100x/1.40 OIL),可轻松进行标准固定样品成像。它可实现非常高的数值孔径和分辨率。对于较为复杂的实验,使用新型 STED WHITE Glycerin 物镜 (HC PL APO 93X/1.30 GLYC motCORR) 可为您创造新的机遇。电动修正环可根据不同的盖玻片厚度、温度和样品不均匀性,精确、快速调节光学物镜。3D STED 在室温和 37°C 下都能清晰呈现样品体表下的细节

  • “该物镜是必需品,值得每人拥有!”- Yasushi Okada博士,日本大阪理研定量生物学中心,
  • ‘’甘油介质的93X STED物镜开辟了生物学成像的很多重要应用领域。‘’-Timo Zimmermann,西班牙巴塞罗那基因调控中心。

新!用于水介质的STED White 物镜!

HCS PL APO 86x/1.2 W motCORR物镜在水环境实验中具有优良性能。电动校正环结合折射率匹配使得该物镜是水介质成像的理想伙伴。

STED WHITE 物镜的色差校准。灰色虚线和实线分别描绘不同景深。

门控 STED – 通往活细胞纳米显微成像的坦途

活细胞成像:麻醉果蝇幼虫体表下大约 10 µm 处沿轴突移动的致密核心囊泡 (标有 ANF GFP)。每隔 0.45 秒记录一张共聚焦和 STED 图像。上方影像:通过 TrackMate (FiJi) 执行的粒子追踪。

gSTED – 图像更多,精细结构更入微

门控 STED 为备受认可的 STED CW 功能带来实质性的扩展,能够获得更高的分辨率或选择更低的激光功率。

获取更多图像,观测微妙细节!

“实际上,至今为止,在报告的所有 STED 设备中,g-STED 峰值功率低,但提供的图像非常锐利。”

Vicidomini et al.,Nature Methods 2011

悬浮液中活 T细胞。共聚焦和 STED 3D 重构。最大投影。特别感谢:英国牛津大学韦瑟罗尔分子医学研究所,MRC 人类免疫学研究单位,Marco Fritsche、Mathias Clausen 和 Christian Eggeling。

使用 HyD 和白光激光实现低于 50 nm 的分辨率

Leica HyD 混合检测器与作为脉冲激发源的白光激光搭配使用,可以仅检测来自激发脉冲之后某一时间窗口的荧光信号。平移时间窗,使其远离激发脉冲,可实现远低于 50 nm 的分辨率。在相同的激光功率下,门控 STED 的分辨率比 STED CW 高 50% 以上。无需更多的 STED 光便能观察更细微的细节,提升活细胞的成像能力。

 

在 STED CW 显微镜有效焦点上,荧光团生命周期的分配。长寿命状态 (红色) 处于中心区域,短寿命状态 (蓝色) 处于外围区域。

第三维度的 STED

多条 STED 光路

使用 TCS SP8 STED 3X 和 TCS SP8 STED ONE,仪器可提供两条光路,产生不同的 STED 模式。STED 光可在两条光路之间无级分配。

设计您的 PSF

您可选择理想横向分辨率、纵向分辨率或两者之间的任意设置,以获取理想的结果。超薄的光学切面为您揭示不为人知的细节。STED 3X 和 STED ONE 使您的显微镜分辨率在所有维度都能契合您的科学问题和样品需要。

“STED X 为 STED 成像增加了第三维度和额外的 STED 谱线,让我们领略到不一样的视觉世界。”

西班牙巴塞罗纳基因组调控中心,Timo Zimmermann 博士

Huygens 反卷积后的Z 轴堆栈(91 个平面)的表面渲染 3D 重构。与共聚焦结果 (红色) 相比, STED 使 xy (后面的绿色扇区) 或所有维度 (前面的绿色扇区) 的分辨率最大化时,STED 数据 (绿色) 呈现,横向分辨率明显提升。很显然,3D STED 呈现的观测结构效果更理想。

选择您的分辨率

通过在两条 STED 光路中分配光线提升分辨率:传统涡流圆环可实现理想横向分辨率,新型 z 轴圆环可实现理想纵向分辨率。还可针对最小聚焦容积进行优化。

STED 软件解决方案 – 对分辨率了如指掌

STED 显微技术是快速直接的超高分辨显微技术。使用 LAS X,您可畅享其便捷性。通过预估的有效 PSF 示意图,可以直接在线查看对所选技术参数效果的反馈。

直观的工作流程

通过智能 STED 向导,只需滑动三个简单的滑块,便可控制仪器。借助有效 PSF 示意图,在衍射极限的情况下,您可定义您所需的超高分辨率等级。为了得到理想结果,向导将调节所有必要的设置,如 STED 激光强度、像素尺寸、Z 步进、针孔、门控设置和图像平均次数。

“以 3D 方式执行 STED 将使我们的研究更上一层楼 – 完全切合研究人员的需要。”

 

英国牛津大学,Christian Eggeling 博士

智能 STED 工作流程:1. 使用 STED 和 3D 滑块调节所需的有效 PSF。2. 使用剂量滑块在信噪比和图像数量之间选择。3. 确定共聚焦实时扫描时的感兴趣区域,并相应调节激发光。4. 采集单幅或自动序列图像,获得超高分辨率数据。