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细菌实验方案 - 对大肠杆菌样本实施临界点干燥以进行SEM分析

徕卡EM CPD300的应用文档 - 生命科学研究

Bacteria_Protocol_part.jpg

简介
样本：大肠杆菌
对大肠杆菌样本实施临界点干燥后，进行铂/钯金属镀膜，后用SEM拍摄微观形貌
程序
样品架：
将样本放入一个滤盘中（孔径：16-40μm），置入滤盘和多孔样品架内。
培养
在含有培养基的琼脂上培养真菌和细菌，为期3天。选取部分细菌菌落。

固定和脱水

溶于PBS缓冲液的3%戊二醛溶液，pH7.3，4°C 16 小时
蒸馏水  3x10 分钟.
1%四氧化锇水溶液，4°C 16 小时
蒸馏水  3x10 分钟.
乙醇溶液: 30%, 50%, 70%, 80%, 90%, 96%, 100% at 25°C 1x10 分钟.
丙酮溶液: 30%, 50%, 100% 1x10 分钟.

徕卡EM CPD300全自动程序

镀膜

用碳粘接剂将干燥后的样本粘附在样本台上。
铂/钯镀膜：6nm

图1: 大肠杆菌
图2：大肠杆菌

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