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Leica SR GSD 3D Life Science Research Microscopy Leica Leica Microsystems
Leica SR GSD 3D se destaca por su precisión única para la localización de moléculas individuales, la estabilidad del sistema, el rendimiento óptico y la facilidad de funcionamiento. Estos atributos resultan fundamentales para obtener resultados reproducibles y de elevada calidad en el menor tiempo posible. Todos los componentes ópticos se corrigen apocromáticamente para adaptarse a los elevados estándares de Leica Microsystems. El software permite una calibración precisa y, además de la calibración estándar con microesferas de oro, también ofrece calibraciones específicas de color con microesferas fluorescentes o moléculas de tinción de la muestra.

Localización de confianza y resolución máxima en X, Y y Z

Con una microscopía de reconstrucción óptica estocástica (GSD o dSTORM), es posible lograr imágenes de superresolución con una resolución lateral de hasta 20 nm. Sin embargo, la resolución en Z de un microscopio de campo amplio todavía se limitaba a varios cientos de nanómetros. Como pionero de la microscopía de superresolución, Leica Microsystems desarrolló Leica SR GSD 3D, para reducir este límite a una resolución de 50 nm en dirección axial y fijar nuevos estándares en precisión para la localización en 3D. 

TheScientist Top10 Innovations 2013

Resolución máxima lateral reducida a 20 nm

Basado en la tecnología GSDIM, Leica SR GSD 3D supera los límites de resolución anteriormente fijados por otros sistemas de superresolución. GSDIM y STED están patentadas por Stefan Hell, del Instituto Max Planck, Göttingen (Alemania), y Leica Microsystems es propietario exclusivo de la licencia.

Proyección en línea de imágenes de superresolución: vea los resultados mientras se adquieren

Leica SR GSD 3D ofrece la proyección en línea de la imagen de superresolución. Durante la adquisición, el usuario visualiza en línea la creación de la imagen. Esta función permite que el usuario controle totalmente el experimento. Puede decidir detener o continuar la adquisición de la imagen en cualquier momento para obtener un resultado satisfactorio.

RCC-FG1 cells

Flexibilidad total de la aplicación gracias a la combinación de superresolución con TIRF y epifluorescencia en un sistema multiuso de obtención de imágenes de células vivas

La estación de trabajo le permite realizar experimentos cotidianos, desde la obtención de imágenes en alta velocidad, pasando por lapso de tiempo, hasta TIRF, mientras amplía el procesamiento de imágenes al ámbito de la superresolución.

Se pueden usar fluorocromos estándar. No es necesario que modifique sus protocolos.

El flujo de trabajo de GSD se basa en técnicas de inmunotinción estándar y se integra perfectamente a los flujos de trabajo existentes para la microscopía de fluorescencia.

La opinión de los expertos

alf Jacob, Sebastian Bänfer, de la Universidad Philipps de Marburgo, Alemania, y Tamara Straube, de Leica Microsystems, usuarios expertos de GSD, comentan su experiencia con Leica SR GSD 3D en biología celular. Youtube video.

Daniela Leyton Puig, del Instituto del Cáncer de los Países Bajos (NKI-AVL), Ámsterdam, explica por qué la microscopía de superresolución GSD es el método favorito para analizar complejos de proteínas en la membrana celular. Youtube video

Sebastian Tille, de Leica Microsystems, explica las ventajas del nuevo sistema de superresolución de campo amplio Leica SR GSD 3D. Youtube video.

Kees Jalink, PhD, y Leila Nahidi Azar, del Instituto del Cancer de los Países Bajos (NKI-AVL), Ámsterdam, explican por qué Leica SR GSD 3D resulta muy útil en la investigación del cáncer.

Estabilidad láser y corrección de color máximas, autofluorescencia mínima

Objetivo de alta potencia especialmente diseñado para superresolución

Leica SR GSD 3D está equipado con un objetivo de alto rendimiento de 160x, específicamente desarrollado para microscopía de superresolución. Su diseño está optimizado para emisiones láser de alta potencia. La autofluorescencia extremadamente baja asegura una elevada relación señal-ruido, ideal para las aplicaciones de detección de moléculas individuales. La destacada corrección apocromática mejora aún más los resultados de la imagen.

Localización precisa con una lente cilíndrica en la trayectoria del haz de emisión

El principio de la localización en 3D con el enfoque del astigmatismo

Para la localización de moléculas individuales en microscopía de fluorescencia GDSIM o dSTORM, se registra la función de distribución de puntos (PSF) de cada molécula y se realiza un ajuste para determinar la posición del fluoróforo. Con un microscopio de fluorescencia normal, la posición lateral del fluoróforo se define con la PSF normal (izquierda). Si se añade una lente cilíndrica a este sistema, se obtiene una PSF diferente (astigmatismo) (derecha). Las imágenes correspondientes permiten la determinación de la posición Z de una molécula detectada, lo que permite por tanto la reconstrucción en 3D.

Para asegurar la reproducibilidad de los resultados, la lente cilíndrica se posiciona con precisión en la trayectoria del haz de emisión tan pronto como el sistema cambia de registro 2D a 3D, no manualmente, sino de forma automática con un solo clic del mouse mediante el control del software.

La platina SuMo minimiza la desviación para lograr precisión en la localización de moléculas

Jamás se compromete la precisión ni la estabilidad

Con la platina SuMo, Leica Microsystems incorpora una novedosa tecnología de compensación de la desviación, por lo que la desviación máxima del sistema queda por debajo de la resolución durante la adquisición.

Esto hace posible observar la imagen de superresolución durante la adquisición. La tecnología especial SuMo (eliminación del movimiento) asegura no solo la desviación mínima, sino también la estabilidad máxima durante la detección.