Cicatrización de heridas con PAULACicatrización de heridas con PAULA

¿Cómo puede ayudar PAULA a agilizar el flujo de trabajo de mi experimento de wound healing?

La prueba de wound healing, a menudo utilizada como sinónimo de prueba de raspado o de migración, es una herramienta importante para la evaluación y medición de la migración celular, ya sea de células individuales o de poblaciones celulares. La migración celular se controla estrictamente durante los procesos ontogénicos y a veces puede descontrolarse, por ejemplo, durante el desarrollo y la progresión de un cáncer.

Las preguntas importantes a tratar con respecto a la migración de células son:

  • ¿Cómo altera un medicamento en particular el índice de migración de mis células?
  • ¿Con qué rapidez migran mis células bajo ciertas condiciones?

El experimento de wound healing

El procedimiento básico para realizar un experimento de wound healing es bastante sencillo. Se genera una banda artificial libre de células en una monocapa celular 100% confluente y se controla la capacidad de las células para cerrar este espacio.

Es necesario considerar y estandarizar muchos parámetros para obtener resultados fiables y reproducibles. Las siguientes secciones tratarán algunos aspectos generales sobre el control de células y demostrarán cómo PAULA puede ayudar a simplificar las tareas de flujo de trabajo.

Métodos de contraste adecuados

En una configuración de microscopio de campo claro estándar, la mayoría de las monocapas celulares son relativamente difíciles de detectar o incluso "invisibles". Con el contraste de fase, se resalta la "forma" de la célula y permite que las células se detecten fácilmente. Sin embargo, la configuración de un microscopio manual con contraste de fase puede ser complicada y requerir mucho tiempo, especialmente para usuarios no formados para ello. En general, se puede utilizar la fluorescencia para controlar factores adicionales de la migración. Sin embargo, no debe utilizarse como método de contraste estándar, ya que el fotoblanqueo y la fototoxicidad pueden alterar significativamente la migración.

  • PAULA ofrece contraste de fase libre de alineación que no necesita un ajuste preciso.
  • El contraste de fase se puede activar con un solo clic.
  • Se puede añadir imagen de fluorescencia (emisión roja y verde, por ejemplo, células marcadas con GFP y proteína fluorescente roja) en caso necesario

Prueba de wound healing con un cultivo celular monocapa 100% confluente

Lo importante es encontrar el momento adecuado. En la mayoría de los casos, las pruebas de wound healing se realizan con una monocapa celular 100% confluente. El hecho de mantener las células en crecimiento una vez que han alcanzado el 100% de confluencia puede inducir desprendimientos celulares e incluso la inhibición de las células vecinas. Por lo tanto, encontrar el momento adecuado para iniciar la prueba de wound healing es crítico para realizar con éxito experimentos que produzcan resultados significativos.

  • PAULA le informa por correo electrónico cuando sus células han alcanzado la confluencia deseada.
  • Ya no es necesario ir al laboratorio de cultivo celular y revisar las células manualmente.
  • Puede encontrar el momento perfecto para comenzar la prueba de wound healing.

Las condiciones ambientales óptimas son cruciales

Las pruebas de wound healing a menudo se realizan utilizando un análisis de tipo "punto final". Los cultivos tienen que sacarse del incubador y las células deben revisarse manualmente para determinar el momento en el que la herida está completamente cerrada. Este enfoque consume mucho tiempo y no es realmente preciso. Alternativamente, el cultivo puede mantenerse en un microscopio equipado con una cámara climática. En principio, funciona bien, pero las fluctuaciones de la temperatura y del CO2 no pueden excluirse por completo. Entonces, ¿por qué no mantener las células donde es más probable que den mejores resultados? Es decir, en un incubador con las condiciones ambientales más optimizadas posibles para el cultivo celular.

  • PAULA se puede colocar dentro de un incubador de cultivos donde las células se mantienen en condiciones óptimas.
  • El enfoque es estable durante días, sin necesidad de reajustes.
  • PAULA obtiene grabaciones en time-lapse y calcula instantáneamente la velocidad de migración actual y el porcentaje de cierre de la herida, así como el tiempo estimado para un cierre al 50%.
  • El estado de la célula y los resultados pueden controlarse constantemente desde cualquier lugar.

Es importante que la anchura de la banda sea uniforme

En muchos casos, el espacio libre de células en la monocapa se crea manualmente con una punta de pipeta. El tamaño del raspado depende en gran medida de la presión aplicada a la superficie monocapa. Sin embargo, para obtener resultados reproducibles, es importante que el tamaño del raspado sea uniforme.

  • Determine el ancho exacto del espacio entre células con la regla integrada de PAULA.
  • Encuentre más fácilmente tamaños de espacios comparables entre diferentes matraces.
  • PAULA también se puede utilizar para heridas generadas con insertos, por ejemplo, de ibidi.

Otros parámetros importantes para la reproducibilidad

Además del tamaño de la herida y las condiciones ambientales, existen otros factores que pueden influir en la reproducibilidad de las pruebas de wound healing. Por ejemplo, parámetros técnicos como los ajustes de imagen y captación y la calibración del sistema, así como las condiciones de las muestras como el número de paso de las células. PAULA supervisa ambos tipos de parámetros.

  • PAULA puede registrar el número de pasos del cultivo. De esta manera sabrá en todo momento si está comparando estados celulares similares (manzanas con manzanas o peras).
  • Recupere todos sus ajustes personales utilizados para un espécimen en concreto, incluyendo el ajuste fino de parámetros como la iluminación.
  • No es necesaria una calibración adicional del sistema.

Fácil configuración de los experimentos de wound healing

Si la preparación de un experimento de wound healing es simple y fácil de repetir muchas veces, será mucho más probable que los resultados sean reproducibles Compruebe por sí mismo lo fácil y clara que es la preparación de las pruebas de wound healing con PAULA. Solo son necesarios 3 pasos para comenzar con éxito un experimento de wound healing.

  • Defina su espécimen
  • Defina el time-lapse
  • Defina el área de interés

Lo que cuenta son los resultados

En definitiva, los resultados son lo que realmente cuenta.

  • PAULA ofrece una visualización gráfica de los valores de cierre de discontinuidades y los índices de migración a lo largo del tiempo.
  • Los puntos temporales utilizados para la medida del cierre y el índice se pueden definir arbitrariamente, de modo que los efectos de las células muertas en los bordes de raspado puedan eliminarse.
  • Primero se estima el tiempo para el cierre de la herida al 50% y 100% y después se calculan los valores reales en caso de que se alcancen.
  • Todos los datos se pueden visualizar en una lista y exportar a archivos Excel.
Vídeo de una prueba de wound healing con células HeLa.
PAULA se puede colocar dentro de un incubador de cultivos donde las células se mantienen en condiciones óptimas.
Fácil preparación de las pruebas de wound healing con PAULA Cell Imager

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