Un paso adelante en la eficiencia fotónica

Autor:
Dr. Constantin Kappel, Leica Microsystems

La obtención de imágenes biológicas está cambiando de una ciencia cualitativa a una cuantitativa y centrada en los datos a medida que la demanda se decanta hacia anotaciones cuantitativas de genes in vivo. El objetivo es desentrañar las redes de interacciones funcionales subyacentes. Las disciplinas biológicas, como la neurociencia, la biología del desarrollo, la citobiología y la farmacología, por nombrar algunas, se basan en la obtención de imágenes confocales para obtener conocimientos sobre la organización espaciotemporal de células u organismos vivos. Los sistemas de obtención de imágenes actuales deben actuar como un dispositivo de medición cuantitativa así como reproducir los detalles más precisos con una gran fidelidad. La respuesta de Leica Microsystems es un nuevo concepto de detección, implementado en su detector híbrido Leica HyD.

La obtención de imágenes cuantitativas nunca fue tan fácil

Gracias s su contraste incomparable, Leica HyD ofrece imágenes con calidad de imprenta listas para usar; no se necesita postprocesamiento. Todas las tareas de obtención de imágenes se benefician del nivel de interferencias oscuras bajo, la sensibilidad alta y el gran rango dinámico del Leica HyD. Este último ha aumentado aún más gracias al recuento de fotones individuales. Este sistema representa el enfoque más atractivo para la cuantificación de imágenes, dado que el número de fotones registrados está en proporción directa con la concentración de las moléculas en estudio. De esta forma, se puede acceder a información bioquímica a través del recuento de fotones individuales y la espectroscopia in situ.

Gracias a su eficiencia cuántica alta, normalmente del 45% a 500 nm, su nivel de ruido bajo y su rango dinámico grande, el detector híbrido es el instrumento más versátil de nuestra plataforma confocal Leica TCS SP5. Junto con el concepto de división de haces sin filtros patentado de Leica Microsystems y el diseño de detección espectral sin residuos que no requiere bucles de reciclado en la trayectoria de haces, estas propiedades hacen que el Leica TCS SP5 esté especialmente adaptado para mediciones cuantitativas y obtención de todo tipo de imágenes por igual.

Refuerzo BrightR para muestras muy dinámicas

Algunas muestras biológicas acumulan muchos más marcados fluorescentes en estructuras específicas que otras. Asimismo, el tamaño físico de las estructuras marcadas puede variar en gran medida. Ambas características generan una distribución muy dinámica de la intensidad luminosa. Dichas muestras son intrínsecamente difíciles de registrar, porque las partes brillantes de la imagen están sobreiluminadas o bien las partes oscuras están infrailuminadas.

Leica Microsystems aborda este problema de obtención de imágenes con su innovador modo de obtención de imágenes BrightR (refuerzo de brillo). Con BrightR, las estructuras oscuras se amplifican más que las brillantes, lo que genera una rango dinámico ampliado capaz de capturar estructuras muy brillantes y detalles intrincados en la misma imagen. A diferencia de otras estrategias de adquisición de imágenes que implican un rango dinámico grande, esta se lleva a cabo con un registro de una sola imagen. De esta forma la muestra se expone a la luz una sola vez.