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Leica TCS SP8 MP Confocal Microscopes Leica Leica Microsystems

Multiphoton Microscope Leica TCS SP8 MP

Corte del cerebro del ratón YFP, pila en Z de 720 µm

Codificación del color de profundidad.

Muestra cortesía del Dr. Mark Lessard, The Jackson Laboratory, Bar Harbor, Maine, EE. UU.

Desarrollo del pez cebra durante 17 horas

Expresión de GFP en el citoplasma en placa precordal y notocorda, 980 nm. Tinción nuclear con inyección de ARN H2B-mCherry, 1.030 nm.

Cortesía de BioEmergences USR3695 (IBiSA FBI), Gif sur Yvettes, Francia.

Ratón Thy1-EYFP in vivo, pila en Z

Ratón adulto Thy1-EYFP línea H, in vivo (ventana craneal), pila en Z de 800 µm.

Cortesía del Dr. Masahiro Fukuda, Department of Molecular Therapy, National Institute of Neuroscience, National Center of Neurology and Psychiatry, Kodaira, Tokio, Japón.

Desarrollo del pez de superficie Astyanax mexicanus durante más de 30 horas

Inyección de ARN para tinción mediante GFP farnesilada (membranas, 980 nm) y H2B-mCherry (núcleo, 1.030 nm)

Cortesía de BioEmergences USR3695 (IBiSA FBI), Dr. Sylvie Rétaux, Dr. Hélène Hinaux y Dr. Gaëlle Recher, CNRS, Gif sur Yvette, Francia.

Imágenes de microglías en vivo en un ratón vivo y despierto

Movimiento de microglías en un ratón vivo y despierto, animación en 4D de 217 cortes y 180 segundos.

Cortesía del Dr. Masahiro Fukuda, Department of Molecular Therapy, National Institute of Neuroscience, National Center of Neurology and Psychiatry, Kodaira, Tokio, Japón.

Excitación IR y rotación en vivo simultáneas

Corte de testículo de ratón con expresión de dTomato (OPO).

Muestra cortesía del Dr. Mark Lessard, The Jackson Laboratory, Bar Harbor, Maine, EE. UU.

Desarrollo del Tunicado (Phallusia mammillata) durante más de 6,5 horas

Tinción del núcleo mediante inyección de ARN (H2B-eGFP, 980 nm); membrana mediante baño en FM4-64 (1.030 nm).

Cortesía de BioEmergences USR3695 (IBiSA FBI), Gif sur Yvettes, Francia.

Movimiento del calcio en ratón GCaMP3 posterior a la lesión del podocito

Movimiento del calcio posterior a la lesión del podocito (abajo a la derecha) en un glomérulo de un ratón GCaMP3. Vasculatura marcada con Texas Red.

Cortesía del Dr. Matthias Hackl, University Clinic Cologne, Alemania.

Imagen multicolor de un embrión de pez cebra

Primordio de la línea lateral marcado con GFP (verde), neuronas con DsRed (rojo) y núcleo con BFP (azul). Señal SHG de los músculos (gris).

Cortesía del Dr. Lionel Newton, EMBL Heidelberg, Alemania.

Señal SHG y marcador de neuronas parasimpáticas en páncreas aclarado

Neuronas tirosina hidroxilasa positivas (rojo), SHG a 1.080 nm (verde), Dapi (azul).

Cortesía del Dr. Rafael Drigo, Per-Olof Berggren Laboratory, Lee Kong Chian School of Medicine (LKCSoM), Singapur.

Desarrollo del embrión del pez cebra durante 21 horas

Secuencia en 4D, pilas de 420, 3 canales superpuestos: Inyección de ARN H2B (azul), mCherry (rojo), EGFPras (verde).

Cortesía de BioEmergences USR3695 (IBiSA FBI), Gif sur Yvettes, Francia.

Inyección de ARN en pez cebra (gastrulación) para tinción citoplasmática de proteína fluorescente Neptune

THG (en azul); 20x1NA; InSight en 1.140 nm.

Cortesía de BioEmergences USR3695 (IBiSA FBI), Gif sur Yvettes, Francia.

Ganglio linfático del ratón con macrófagos marcados con GFP

Señal SHG de colágeno (gris).

Cerebro de ratón Thy1-YFP tratado con CLARITY

Animación generada con visualización en 3D de LAS X.

Cortesía de Prof. Karl Deisseroth y Raju Tomer, Stanford University, Palo Alto, California, EE. UU.

Ver a través del cerebro

El video de Nature revela cómo Karl Deisseroth y su equipo crearon visualizaciones en 3D de cerebros de ratones utilizando CLARITY y marcación fluorescente.

Animación en 3D del bulbo olfatorio de un ratón

Profundidad de 1,5 mm.

Cortesía del Dr. Günter Giese y de Annemarie Scherbarth, MPI Heidelberg, Alemania.

Generación del segundo armónico (SHG)

Generación del segundo armónico (SHG), también se denomina duplicación de frecuencia, es un proceso óptico no lineal que se puede observar en medios sin simetría de inversión. Dos fotones con la misma frecuencia que interactúan con un material no lineal se transforman en uno que tiene exactamente la mitad de la longitud de onda de la luz incidente. En otras palabras, la potencia y la frecuencia del fotón emitido se duplica en comparación con el que ingresa en la muestra.

Imágenes de tejidos profundos

brote ureteral de un riñón embriónico de día 16 de un ratón EGFP HoxB7.

Cortesía de Deborah Hyink, Mount Sinai School of Medicine, New York, NY, EE.UU.

Excitación simultánea con OPO y Ti:Sa

Glándula mamaria (izquierda) y bazo (derecha) de ratón. Vasos sanguíneos marcados con 70kD-Texas Red excitado con OPO a 1.150 nm (rojo). La excitación simultánea a 800 nm provoca una señal de generación del segundo armónico (SHG) de colágeno de tipo I (púrpura) y autofluorescencia de células individuales (verde).

Cortesía de Evelyne Beerling, Dr. Jacco van Rheenen, Hubrecht Institute, Utrecht, Países Bajos

Adquisición rápida de pilas en Z de animales vivos

Reconstrucciones en 3D de pilas en Z de 50 µm representativas a partir de adquisiciones secuenciales. Excitación a 910 nm, la separación espectral se efectuó utilizando el software LAS AF.

Izquierda: se muestra la microglía marcada con GFP (verde) en relación con vasos sanguíneos inyectados con puntos cuánticos de 655 nm (rojo) que residen en la parénquima cerebral. Los procesos de algunas microglías se envuelven en vasos sanguíneos. Generación del segundo armónico (SHG) del hueso craneal (azul).

Derecha: bazo siete días después de la infección con virus de la coriomeningitis linfocítica (LCMV). Células T CD8-CFP (rojo) y CD4-YFP (verde) antivíricas.

Cortesía de Debasis Nayak, Bernd Zinselmeyer and Dorian McGavern, National Institute of Neurological Disorders and Stroke, NIH, Bethesda, MD, EE. UU.

Imagen ultrarrápida de la circulación de la sangre embriónica

Corazón embriónico del pez cebra, a 100 µm de profundidad. Glóbulos sanguíneos marcados con DsRed (red), SHG muscular (gris).

La secuencia de la derecha se adquirió con el escáner de resonancia a 167 fotogramas/segundo y 512 x 64 píxeles. Excitación multifotónica a 1100 nm con OPO.

Cortesía de Julien Vermot, IGBMC, Strasbourg-Illkirch, Francia

Diafragma de ratón

Señal muscular (rojo) de generación del segundo armónico, neuronas motoras (verde).

Cortesía de Rüdiger Rudolf, Institute of Toxicology and Genetics, Karlsruhe Institute of Technology, Alemania.

Principio de la microscopía multifotónica

La probabilidad de excitación linear de un fotón (izquierda) depende de la cantidad de fotones procedentes de la fuente de luz. En la excitación bifotónica (derecha) es proporcional al cuadrado de la intensidad de la fuente de luz y se limita a la proximidad del plano focal.

Principio de la microscopía multifotónica

Niveles de energía de un fluoróforo en la excitación monofotónica (izquierda) y bifotónica (derecha). Los colores corresponden a las longitudes de onda absorbidas y emitidas. Dr.