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FLCS y FCS sincronizado – Método

Las mediciones de FLCS se realizan con el sistema Leica TCS SP8 SMD.

Básicamente, FCS se puede realizar con un láser de onda continua. El uso de láseres pulsantes permite la posibilidad de análisis aún más sofisticados, como "time-gated" FCS o FCS de tiempo de vida de fluorescencia (FLCS). Ambos métodos utilizan la información adicional obtenida por la medición simultánea del tiempo de vida de la fluorescencia.

"Time-gated", por ejemplo, se selecciona únicamente para el análisis de aquellos fotones que se pueden atribuir claramente a la disminución de fluorescencia. La supresión de luz parásita (Rayleigh, Raman) a partir de la señal detectada permite una medición precisa de la concentración.

En FLCS, cada fotón se pondera estadísticamente según lo que contribuye al análisis de datos FCS. Se puede utilizar para corregir artefactos del detector o contribuciones a la dispersión.

Incluso permite la supervisión simultánea de dos marcadores con espectros de emisión completamente solapados y con coeficientes de difusión muy similares utilizando un solo detector.

Muestra: GalNacT2-GFP expresada en células HeLa analizadas con FLCS. Nuestro agradecimiento para el Dr. Matthias Weiss, el Dr. Jedrzej Szymanski y Nina Malchus, DKFZ, Heidelberg.

4. Comparación de curva FCS (sin filtro de tiempo) con curva FLCS (tras filtrado de tiempo)