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SP8 DIVE Leica Leica Microsystems
Intestin grêle de souris Confetti. Traceur de lignée cellulaire. Cyan : CFP, vert : GFP, jaune : YFP, rouge : RFP. Recherche sur le cancer du côlon. Échantillon fourni gracieusement par Jacco van Rheenen. Université d'Utrecht, Pays-Bas.

Profitez de la liberté spectrale avec 4Tune

Le nombre de marqueurs transgéniques évolue constamment et rapidement. Le SP8 DIVE suit ces développements et s'adapte en quelques clics de souris aux marqueurs transgéniques existants et aux nouveaux.

La liberté spectrale résulte de la nouvelle technologie innovante 4Tune pour la détection non descannée. Le détecteur 4Tune vous permet de vous adapter  àl'émission de fluorescence de votre échantillon et de séparer des spectres qui se chevauchent fortement – sans restauration mathématique.

Le SP8 DIVE vous permet de capturer deux fois plus du signal de fluorescence, ce qui se traduit par une profondeur de pénétration et une vitesse d'imagerie améliorées, ou moins de phototoxicité pour l'imagerie in vivo.

"Les dichroïques conventionnels ne sont jamais optimaux pour distinguer tous les fluorophores, mais avec les détecteurs spectraux, c'est maintenant possible et bien plus facile, car nous pouvons vraiment optimiser la longueur d'onde pour chaque fluorophore à détecter."

Professeur Jacco van Rheenen. Université d'Utrecht, Pays-Bas 

Alberto Diaspro

Istituto Italiano di Tecnologia (IIT), Genua

"Permet magnifiquement de disséminer encore plus la microscopie multiphotonique, de nos jours. C'est une grande avancée, étant donné la gamme agrandie d'applications et la solution apportée à de nombreux problèmes liés à la variété d'échantillons. L'intégration efficace de la SHG et des images biphotoniques mérite d'être soulignée.

Je pense que la possibilité de couplage avec d'autres solutions et produits Leica, dont les modules STED, permettra d’adapter cette architecture en fonction des divers besoins expérimentaux, de la résolution spatiale et de la résolution temporelle aux fluorophores et méthodes à venir.  

J'aime beaucoup la possibilité de contrôler et visualiser le remplissage du plan focal arrière en élargissant ou rétrécissant le faisceau lumineux d'excitation biphotonique. C'est génial."

Sophie Allart

Ingénieur de Recherche
INSERM, Centre de physiopathologie de Toulouse Purpan

"La modularité des fonctions est incroyable. De plus, l'utilisation des blocs de filtres devant les détecteurs NDD influe sur le choix des fluorochromes, et nous sommes parfois obligés d'adapter la préparation d'échantillon et de changer les fluorochromes. Désormais, cela sera beaucoup plus facile.

Je suis convaincue. Cela fait maintenant 10 ans que je fais de la microscopie multiphotonique sur quatre marqueurs, d'où mon très grand intérêt."

Kees Jalink

Netherlands Cancer Institute

"Je viens de faire une démo et je suis époustouflé. Je pense que c'est absolument merveilleux et que vous apportez maintenant à l'infrarouge tout ce que nous avions en lumière visible. Vous avez fait un travail remarquable."

Ron Hoebe

LCAM, van Leeuwenhoek Centre for Advanced Microscopy, University Amsterdam

"J'aime le nouveau détecteur spectral biphotonique. Ce que j'aime le plus est la façon dont il est intégré au logiciel.

Je gère un centre d'imagerie, et plus un équipement est facile à utiliser, mieux c'est. Nous avons plus de 200 utilisateurs et cela prend du temps de les former sur des appareils très complexes.

Alors, plus c'est facile, plus c'est intuitif, mieux c'est."

Ammasi Periasami

W.M. Keck Center for Cellular Imaging, VA

"J'aime le réglage des longueurs d'onde de 740 à 920. C'est une très bonne option pour ce qu'on peut utiliser. Je veux dire combien de longueurs d'onde ils veulent utiliser en fonction du fluorophore. Et oui, s'ils utilisent une longueur d'onde et ont ensuite deux ou trois détecteurs pour voir ce qui se passe et accorder l'ensemble, les options sont nombreuses.

Le rapport signal-bruit est très bon, il y a de la flexibilité du côté de l'émission.

Pas de doute, c'est très important de voir la convivialité du système. C'est ce que je recherche. Depuis que je travaille avec Leica, je suis attentif à la convivialité du fonctionnement biphotonique par rapport au monophotonique."

[Pendant cette démonstration effectuée lors de Focus on Microscopy 2017, 4 marqueurs ont été acquis séquentiellement avec le SP8 DIVE équipé d'un laser IR et de deux détecteurs spectraux HyD-NDD. Excitation à 740 nm (Alexa Fluor 350 pour le mucus de cellules caliciformes, Sytox Green pour les noyaux cellulaires) et excitation à 920 nm (SHG pour le collagène, Alexa Fluor 568 phalloidin pour la F-actine).] 

Marc van Zandvoort

Maastricht University, Genetics and Cell Biology

"Très belle extension des systèmes biphotoniques actuels. Cette extension rend le système beaucoup plus flexible lors de l'utilisation des détecteurs biphotoniques directs.

Jusqu'à présent, cette utilisation était très limitée, en raison de la nécessité d'avoir des filtres séparés. Dans ce sens, c'est une très bonne extension."

Urs Ziegler

Head of Facility, Center for Microscopy and Image Analysis, University of Zurich

"C'est très flexible et très facile à utiliser. Vous n'avez pas à changer les filtres manuellement et vous pouvez utiliser tous les colorants imaginables.
J'apprécie que, dans le logiciel, vous n'avez pas à former quelqu'un qui connaît déjà la microscopie à balayage confocal. Vous n'avez pas à changer les filtres manuellement – DIVE est facile à utiliser parce qu'il tient compte des différentes combinaisons de filtres et colorants, ce qui, bien qu'étant possible, n'est pas si facile à faire. C'est déjà un avantage majeur.

Et bien sûr, dans un tissu vivant il y a divers marqueurs que vous pouvez utiliser, deuxième et troisième harmoniques. Avec SP8 DIVE, on peut faire cela très, très facilement. Je pense que c'est une avancée majeure."

PLONGEZ (DIVE) aisément – le détecteur 4Tune

Le module non descanné 4Tune peut être équipé de 2 à 4 détecteurs et  est librement configurable avec des détecteurs hybrides (HyD), des photomultiplicateurs (PMT), ou un mélange des deux. La fluorescence est séparée par une combinaison de miroirs dichroïques et filtres passe-bande variables. L'accordabilité du système de détection couvre une plage de longueurs d'onde de 380 à 800 nm.

L'interface utilisateur de 4Tune vous permet d'optimiser par un simple "drag and drop" le réglage de l'émission pour de multiples marqueurs transgéniques. Grâce au design clair et intuitif, l'utilisation est facile et nécessite une formation minimale.

Avec le SP8 DIVE, vous êtes équipé pour tous les marqueurs transgéniques existants et développés récemment, et prêt pour le futur et ses nouveaux développements !

Système de détection non descanné 4Tune : 1) Miroir dichroïque variable. 2) Filtre passe-bande variable. 3) HyD ou PMT.
L'interface utilisateur intuitive de 4Tune permet de régler facilement les fenêtres de détection pour toutes les couleurs de 380 à 800 nm.
Patte de souris. Fibre musculaire marquée avec Rab5-GFP. IRAPO 40x 1.1. Gauche : Résolution optimale. Droite : Pénétration profonde. L'utilisation du réglage pour une meilleure pénétration double approximativement la quantité de lumière collectée. Cela augmente donc la profondeur de pénétration. Échantillon fourni gracieusement par le professeur Rudolf, University of Applied Sciences, Mannheim.

Explorez en profondeur de nouvelles dimensions

Avec le SP8 DIVE, vous pouvez ajuster le système pour une exploration en profondeur avec des détails fins. Tous les faisceaux d'excitation peuvent être ajustés de façon optimale et indépendante pour tout objectif utilisant le nouveau module Vario Beam Expander (VBE).

Le VBE permet une colocalisation optimale et le juste équilibre entre résolution et profondeur selon la question scientifique.

Optimisez la profondeur et la résolution avec le module Vario Beam Expander

Le module Leica Vario Beam Expander (VBE) permet l’ajustement du diamètre du faisceau et de la divergence. Cette technologie vous permet d'obtenir une profondeur maximale, une résolution optimale et une correction chromatique totale.

Diamètre de faisceau accordable pour unajustement optimal de la résolution et de la profondeur

En ajustant le diamètre du faisceau, vous pouvez choisir le meilleur compromis entre la résolution et la puissance d’entrée du laser. Quand vous élargissez le faisceau, vous obtenez un éclairage homogène du plan focal arrière de l’objectif . L'utilisation de cet outil en association avec une ouverture numérique élevée permet d'atteindre une résolution maximale.

Le rétrécissement du faisceau fournit une puissance laser plus importante dans le volume focal, et il en résulte une meilleure pénétration de l'échantillon et une imagerie plus profonde. Avec le VBE, vous pouvez ajuster les faisceaux indépendamment, pour jusqu'à quatre longueurs d'onde IR (infrarouge) différentes, afin de trouver le meilleur équilibre entre la résolution et la profondeur (image du haut).

Divergence de faisceau accordable pour une correction chromatique totale

L'introduction d'une divergence à l'entrée corrige l'aberration chromatique axiale des longueurs d'onde IR différentes. Cela vous permet d'exciter au même point focal dans l'échantillon avec jusqu'à quatre longueurs d'onde IR (image du bas).

Tunable Vario Beam Expander (VBE)
Tibia de souris. Muscle strié. Analyse morphologique du développement d'une jonction neuromusculaire.
Vert : GFP – Rab 5 (GTPase, endosomes). Rouge : mCherry – Bif 1. Gris : AF647- Alpha-bungarotoxine (NMJ). Échantillon fourni gracieusement par le professeur Rudolf, University of Applied Sciences, Mannheim.

Résultats reproductibles pour l'imagerie multicolore en profondeur et in vivo

Excitation multicolore: Excitez de multiples marqueurs transgéniques au sein d’une seule acquisition, avec une séparation parfaite des couleurs. Ou faites même une photomanipulation localisée de haute précision et de l'imagerie simultanément dans un volume limité par la diffraction. Le SP8 DIVE peut être équipé jusqu'à trois lignes d'excitation accordables simultanément et contrôlées en puissance par un modulateur acousto-optique. Comme les lasers sont accordables jusqu'à 1 300 nm, vous pouvez même utiliser des marqueurs rouge et rouge lointain pour les acquisitions multiphotoniques. Moins de dispersion permet une pénétration plus profonde et l'on obtient des images brillantes et très résolues des couches profondes.

TuneIR – Des conditions constamment parfaites de l'instrument procurent des acquisitions décisives: Pour avoir à tout moment des résultats d'une exactitude constante, il est primordial de disposer de conditions fiables et stables pour l'instrument et les faisceaux IR. Dans ce but, nous combinons un nouveau capteur de faisceau avec notre module Vario Beam Expander. Nous nous assurons que vous obtenez des conditions d'imagerie reproductibles et parfaites pour jusqu'à trois lignes d'excitation accordables et la parfaite colocalisation des marqueurs multiples.

Polyvalence et protection de l'investissement

Le SP8 DIVE est basé sur la plate-forme polyvalente SP8.

Toute la gamme SP8 est combinable avec DIVE, de la microscopie confocale avec super-résolution à la nanoscopie STED.

Développez la plate-forme quand vous en avez besoin – selon la direction prise par votre recherche – maintenant et dans le futur.

top: Versatile platform SP8 (left), Nanoscopy (middle), Super-Resolution (right)
bottom: CARS (left), Light Sheet (middle), SMD (right)