Notre workflow pour la tomographie cryoélectronique

Notre workflow pour la tomographie cryoélectronique Coral Cryo 3D garantissent la viabilité des échantillons, les contrôles de qualité et, surtout, un mécanisme de ciblage 3D précis et fiable.

Le STELLARIS 5 Cryo, incluant la platine cryogénique et le shuttle, est conçu pour une utilisation conjointe avec le logiciel de ciblage de pointe CryoET (LAS X Coral Cryo), et avec une variété d’options d’intégration et de transfert transparentes vers des platines cryogéniques FIB ou VCT.

Améliorez votre productivité grâce à un workflow transparent pour la préparation des échantillons.

Solutions de workflow de tomographie cryoélectronique Coral Cryo 3D

La précision pour un ciblage efficace

Pour les workflow corrélatifs, la récupération des coordonnées exactes de la cible identifiée dans le cryomicroscope optique est cruciale car les signaux de fluorescence ne sont pas visibles aux étapes ultérieures du microscope électronique.

Le ciblage est donc effectué dans le microscope STELLARIS 5 cryo avec des coordonnées en accès libre pour une meilleure interopérabilité des systèmes.

Notre module logiciel pratique LAS X Coral Cryo répond à ces besoins, avec un ciblage 3D innovant basé sur l’interpolation qui permet un positionnement précis des marqueurs de coordonnées en format ouvert à l’échelle nanométrique. Différents types de marqueurs remplissant différentes fonctions sont également disponibles pour le marquage des points de repère, des lamelles et des billes.

LAS X Coral Cryo: Ciblage basé sur l'interpolation en 3D en utilisant des sections à travers la pile z dans les directions x et y. Les marqueurs peuvent être déplacés de manière interactive dans toutes les fenêtres pertinentes.

Obtenez le maximum d’informations à partir de votre échantillon grâce à LIGHTNING

La synergie entre la gamme de détecteurs Power HyD, la trajectoire de faisceau optimisée et le  laser blanc (WLL) vous permet d’obtenir des données plus précises et plus fiables.

Maximisez les informations que vous extrayez de votre échantillon vitrifié et obtenez des réponses approfondies aux questions scientifiques grâce au concept unique de détection LIGHTNING, un processus d’extraction adaptatif qui révèle des structures et des détails fins dans les informations de l’image qui ne sont pas visibles autrement.

Cela vous permet de cibler plus précisément les structures d’intérêt pour les étapes suivantes de votre workflow de microscopie EM.

Non-LIGHTNING
LIGHTNING Cryo

Cellules HeLa marquées en bleu foncé - Hoechst, noyaux; magenta - MitoTracker Green, mitochondries; turquoise - Bodipy, gouttelettes lipidiques. Cellules gracieusement fournies par Ievgeniia Zagoriy, Mahamid Group, EMBL Heidelberg, Allemagne.

Des résultats fiables

En microscopie électronique cryo, l’épaisseur de la glace doit être surveillée tout au long du workflow, et plus tôt elle est vérifiée et évaluée, mieux c’est. Une glace trop épaisse peut causer des problèmes pendant la phase de broyage, tandis qu'une glace trop fine peut affecter la stabilité de l’échantillon.

Le STELLARIS 5 Cryo offre deux modes de vérification de la glace: un aperçu rapide avec la caméra et un mode de réflexion en confocale pour en déterminer l’épaisseurd de la glace en 3D. 

L’objectif Cryo CLEM HC PL APO 50x/0.90 a été conçu pour répondre aux besoins spécifiques de la cryomicroscopie, en offrant en plus les avantages d’une super-résolution sans besoin d'immersion liquide.

Cellules HeLa présentant Hoechst (bleu, noyau), Mitotracker Green (vert, mitochondries), Bodipy (rouge, gouttelettes lipidiques), perles (magenta, 1μm), Reflection (blanc). Barre d’échelle 10 μm: Cellules gracieusement fournies par Ievgeniia Zagoriy, Mahamid Group, EMBL Heidelberg, Allemagne

Potentiel de découvrir plus

Dans le STELLARIS 5 Cryo, notre technologie TauSense unique vous permet d’extraire une couche supplémentaire d’informations pour chaque échantillon et d’augmenter l’impact scientifique de vos recherches.

En plus de l’information spectrale, le temps d’arrivée moyen des photons peut être visualisé. Ce procédé peut être utilisé pour révéler des composants cachés simplement par les différentes durées de vie fluorescentes (TauContrast).

En raison de la température profonde pendant le workflow cryo tels que Coral Cryo, les fenêtres d’émission et d’excitation des fluorophores convergent. TauSense vous permet de séparer les fluorophores qui se chevauchent en raison de leurs différents temps d’arrivée moyens des photons.

Diatomées examinées avec les outils d’imagerie TauSense. Image d’intensité de la bande spectrale 500-640nm. TauContrast - Tableau de correspondance indiquant le temps d’arrivée moyen des photons; temps d’arrivée courts en bleu, temps d’arrivée plus longs en jaune vers le rouge. Différentes structures sont révélées. TauSeparation - Deux composantes de durée de vie sont séparées, la composante 1 découpant l’autofluorescence du chloroplaste, 0,1ns; la composante 2 révélant le signal LifeAct-GFP propre, 2,7ns de temps d’arrivée moyen. Échantillons gracieusement offerts par Nicole Poulsen, B CUBE, TU Dresden, Allemagne.

Productivité pour vos expériences

Dans tous les workflows cryogéniques, les échantillons doivent être maintenus dans des conditions complètement déshumidifiées et cryogéniques dès que l’échantillon est vitrifié.

Notre kit de cryomicroscopie innovant avec platine cryogénique et shuttle assure un chargement sûr et intuitif de l’échantillon et un transfert simple tout en maintenant constamment des conditions cryogéniques sûres pour vos spécimens.

La platine cryogénique vous permet de réaliser de la microscopie optique dans des conditions cryogéniques stables tout en autorisant tous les mouvements nécessaires à l’imagerie 3D super résolue en maintenant une légère surpression constante d’azote gazeux par rapport à l’atmosphère environnante

Pour rendre le processus de chargement encore plus sûr pour vos échantillons, un boîtier optionnel accueillant le shuttle de transfert est disponible pour le processus de chargement afin d’assurer un chargement sûr dans toutes les conditions, de fournir un contrôle supplémentaire du processus et d’étendre la fenêtre de temps de chargement sûr.

Microscope confocal optique STELLARIS 5 Cryo

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