Fluorescence lifetime imaging: più spazio alla fluorescenza che al colore

La microscopia fluorescence lifetime imaging (FLIM) è una tecnica di imaging che sfrutta le proprietà intrinseche dei coloranti fluorescenti. Oltre ad avere uno spettro di emissione caratteristico, ogni molecola fluorescente ha anche un lifetime caratteristico, che riflette quanto tempo il fluoroforo passa nello stato eccitato prima di emettere un fotone. L'analisi del lifetime fornisce informazioni ulteriori rispetto alle misurazioni standard di intensità di fluorescenza.

Storicamente, il lifetime imaging è stata una tecnica lenta, complessa e che richiedeva utilizzatori specializzati. Il suo uso era limitato a microscopisti o a fisici esperti. Leica Microsystems è al passo con gli attuali progressi sul fuorescence lifetime imaging. I nostri sistemi rendono il fluorescence lifetime imaging più facile da realizzare e più veloce di sempre integrandone i vantaggi negli esperimenti quotidiani di microscopia confocale.

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Migliora l'imaging confocale con le informazioni legate al lifetime della fluorescenza

Il Fluorescence Lifetime Imaging fornisce informazioni aggiuntive che possono aiutare a migliorare la qualità delle immagini acquisite con il microscopio confocale. Ciò può essere particolarmente utile per discriminare le sonde a fluorescenza che hanno spettri di emissione sovrapposti o per eliminare il segnale di fondo indesiderato.

Il FLIM è un'applicazione fondamentale per la misurazione e la quantificazione dei dati di microscopia. Dato che le informazioni legate al lifetime sono indipendenti dalla concentrazione del fluorocromo, risultano estremamente adatte per l'imaging funzionale. L'imaging funzionale va oltre la tradizionale registrazione della localizzazione e della concentrazione delle specie molecolari e consente di eseguire indagini ulteriori sulla funzione molecolare, sulle interazioni e sul relativo ambiente.  

Inoltre, con il FLIM si possono impiegare nuove applicazioni di imaging, quali l'uso di biosensori, per studiare il microambiente cellulare o l'imaging basato sulle proprietà intrinseche di fluorescenza del campione.

Ulteriori informazioni sul FLIM e sulle relative applicazioni di imaging con il sistema SP8 FALCON sono disponibili in questa nota applicativa.

Il contrasto dato dal lifetime del sepalo di silverberry permette di separare le diverse strutture all'interno del campione. L'immagine basata sull'intensità (immagine gialla) non mostra alcuna struttura specifica, mentre l'immagine FastFLIM (immagine in scala arcobaleno) e le immagini lifetime ottenute attraverso fitting (RGB, immagine a tre componenti) forniscono informazioni sulle diverse componenti del campione. La parte finale del video mostra tre strutture evidenziate a seguito del fitting del lifetime suddiviso in tre canali (RGB).

Stabilire lo standard per il lifetime imaging

Con l'introduzione della tecnologia rapida e completamente integrata di lifetime imaging - SP8 FALCON - Leica Microsystems ha fissato il punto di riferimento per il futuro del lifetime imaging. Leica Microsystems è stata insignita del prestigioso premio R&S 100 per il sistema SP8 FALCON. Questo premio riconosce l'approccio innovativo al lifetime imaging.

Le soluzioni di Leica Microsystems per la tecnica FLIM consentono di sfruttare la potenza del lifetime della fluorescenza per estrapolare una nuova dimensione di informazioni da ogni campione con il proprio esperimento confocale. Esamina la fisiologia cellulare ed esplora le dinamiche cellulari con FALCON. Ottieni accesso immediato alle informazioni funzionali, quali lo stato metabolico, il pH e la concentrazione ionica utilizzando il potenziale di Tausense contenuto in STELLARIS.

Le nostre piattaforme semplificate e integrate consentono di acquisire nuove prospettive sugli esperimenti e di poter trovare nuove risposte alle domande sperimentali.

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