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Confetti Mouse Small Intestine. 청록색: CFP, 녹색: GFP, 노란색: YFP, 빨간색: RFP.
시료 제공: 네덜란드 위트레흐트 대학교, Jacco van Rheenen 교수

4Tune으로 스펙트럼의 자유를 누리세요 

형질전환 마커(transgenic markers)는 계속해서 빠르게 그 수가 증가하고 있습니다. SP8 DIVE는 이러한 변화에 발맞추어, 몇번의 마우스 클릭만으로 기존의 형질전환 마커와 새 마커에 적용할 수 있습니다. 

ND(Non-Descanned) 검출을 위한 혁신적인 4Tune 기술로 스펙트럼의 자유가 가능해졌습니다. 4Tune 검출기를 사용하면 전체 방출에 익숙하도록 해주며, 수학적인 복원 없이 강하게 겹치는 스펙트럼을 분리할 수 있습니다.

SP8 DIVE를 사용하면 2배의 형광 신호를 캡처할 수 있기 때문에 생체 내(In vivo) 이미징 시 투과 깊이와 이미징 속도가 향상되고 광독성(phototoxicity)이 감소합니다.

"기존의 다이크로익(dichroic)은 모든 형광물질을 구별하는 데 최상의 방법이 아니지만, 스펙트럼 검출기를 사용하면 검출하려는 각 형광물질에 대한 파장을 최적화할 수 있기 때문에 이제는 훨씬 더 쉬워졌습니다."
네덜란드 위트레흐트 대학교, Jacco van Rheenen 교수

사용이 간편한 DIVE – 4Tune 검출기

4Tune ND(Non-Descanned) 검출기에 2~4개의 검출 유닛을 장착할 수 있고 하이브리드 검출기(HyD), 광전자 증배관(PMTs;photomultipliers) 또는 이 둘을 조합해 자유롭게 구성할 수 있습니다. 방출(emission) 광원은 가변 다이크로익(dichroics) 필터와 대역 통과(bandpass) 필터들의 조합으로 분리되며, 검출 범위를 380~800 nm 사이에서 조정할 수 있습니다.

4Tune 사용자 인터페이스를 사용하면, 간단하게 마우스 드래그로 여러 형질전환 마커의 방출 설정을 최적화할 수 있습니다. . 명확하고 직관적인 디자인으로 조작이 간편하여 최소한의 교육만으로도 작동할 수 있습니다.

SP8 DIVE는 기존의 모든 형질전환 마커뿐만 아니라 새로 개발된 마커까지 지원하여 새로운 발전에 기여할 당신의 미래를 열어줍니다!

상단: 4Tune ND(Non-Descanned) 검출 시스템: 1) 가변 다이크로익(Variable Dichroic) 미러. 2) 가변 대역 통과(Variable Bandpass) 필터. 3) HyD 또는 PMT.
하단: 직관적인 4Tune 사용자 인터페이스를 사용하면 380~800 nm 범위의 모든 색의 검출 구간을 손쉽게 설정할 수 있습니다.
Mouse leg. Rab5-GFP로 표지된 근섬유. IRAPO 40x 1.1. 왼쪽: 최상의 해상도. 오른쪽: 심층 투과. 심층 투과 설정에서 밝기를 약 2배로 증가시키면 투과 깊이가 증가합니다.
시료 제공: Rudolf 교수, 응용 과학 대학교, 만하임

새로운 차원의 깊이 탐구

SP8 DIVE를 사용하면 미세한 디테일을 관찰하여 더 넓은 통찰력을 얻을 수 있습니다. 최신 Vario Beam Expander(VBE)을 이용해 대물렌즈와 상관없이 독립적으로 모든 여기(excitation) 빔을 조정하여 최적화할 수 있습니다.

VBE를 사용하면 연구 목적에 맞게 코로컬리제이션(colocalization)을 최적화하고 해상도와 깊이 간의 균형을 적절하게 유지할 수 있습니다.

Vario Beam Expander를 이용한 깊이와 해상도의 최적화

Leica Vario Beam Expander VBE는 가변식 빔 직경과 가변식 분산(divergence)을 조합합니다. 이 기술은 최대의 깊이, 최상의 해상도 및 완전한 색 보정을 지원합니다.

해상도와 깊이 간의 균형을 최적화하기 위한 가변식 빔 직경(상단 이미지)

빔 직경을 조정하여 해상도와 에너지 입력 간의 균형을 최적화할 수 있습니다. 빔을 넓히면 후방 초점면에 균일한 조사가 이루어져 해상도가 증가합니다. 높은 개구수(NA)의 렌즈와 함께 사용하면 최대 해상도를 얻을 수 있습니다(상단 이미지 오른쪽).
빔을 좁히면 초점 부피(focal volume)에 더 많은 입력 에너지가 집중되어 시료 투과가 향상되고 더 깊은 이미징이 가능합니다(상단 이미지 왼쪽). VBE를 사용하면 최대 4개의 IR(적외선) 파장에 맞게 독립적으로 빔을 조정해 해상도와 깊이 간의 균형을 최적화할 수 있습니다.

완전한 색 보정을 위한 가변식 빔 분산(하단 이미지)

입력(input)-분산(divergence) 조정으로 서로 다른 IR 파장의 축상 색수차를 보정할 수 있습니다. 빔 분산을 조정하여 최대 4개의 IR 파장으로 시료의 동일한 초점에서 여기시킬 수 있습니다(하단 이미지).

상단: Vario Beam Expander(VBE)를 이용한 해상도와 깊이 조정
하단: Vario Beam Expander(VBE)를 이용한 대물렌즈 축상 색수차 보정
Mouse tibia. 횡문근. 신경근 접합부 발달의 형태학적 분석. 녹색: GFP – Rab 5 (GTPase, endosomes). 적색: mCherry – Bif 1. 회색: AF647- Alpha bungarotoxin (NMJ).
시료 제공: 만하임 응용과학대학교, Rudolf 교수

재현 가능한 생체 내(In vivo) 심부 다색 이미징 결과

다색 여기(Multicolor excitation): 완벽하게 색을 분리하기 때문에 한 실험에서 여러 형질전환 마커를 여기시킬 수 있습니다. 또는 회절 한계부피에서 국소화된 고정밀 photomanipulation과 동시 촬영을 수행할 수도 있습니다. SP8 DIVE에 음향 광학 변조로 균형이 맞춰진 최대 3개의 가변식 여기 라인을 동시에 연결할 수 있습니다.
레이저를 최대 1300 nm까지 조정할 수 있기 때문에 다광자 실험에 적외선 및 근적외선 염료를 사용할 수 있습니다. 산란이 감소해 투과 깊이가 증가하고 깊은 층의 디테일을 밝은 이미지로 표현할 수 있습니다.

TuneIR - 일관되고 완벽한 기기 조건으로 정확한 정보 제공: 항상 일관되고 정확한 결과를 얻으려면 믿을 수 있고 안정적인 기기 및 IR 빔 조건이 필수입니다. 이를 위해 혁신적인 빔 캐처 유닛과 Vario Beam Expander를 결합했습니다. Leica Microsystems는 최대 3개의 가변식 여기 라인과 여러 마커의 완벽한 코로컬리제이션(colocalization)을 위한 재현 가능하고 완벽한 이미징 조건을 제공합니다.

DM8 CS 현미경 스탠드를 장착한 SP8 DIVE를 계단식 실험대에 설치하면, 행동 연구를 위한 실험 공간을 더 넓게 확보할 수 있습니다.

행동 연구를위한 공간적 유연성

행동 실험의 경우, 실험 공간 확장을 위해 SP8 DIVE에 DM8 CS 현미경 스탠드를 장착하십시오. DM8 CS는 계단식 실험대에 설치되어 실험 요구사항에 따라 맞춤 설정할 수 있습니다. 이 현미경 스탠드는 크고 복잡한 셋업에 필요한 공간적 유연성을 제공합니다.

SP8 DIVE에 DM8 CS 현미경 스탠드를 장착하면 깨어 있는 동물의 뇌 활동 모니터링과 같은 실험을 수행할 수 있습니다.

DIVE – SP8 플랫폼을 기반으로 한 시스템

SP8 DIVE는 Leica의 SP8 플랫폼을 기반으로 한 가장 최신작입니다. 초고해상도 공초점 현미경에서 STED Nanoscopy에 이르기까지 전체 SP8 제품군을 DIVE와 통합 구성하여 다양한 연구 분야를 수용할 수 있습니다.

이로써 확장성이 높은 SP8로 다양한 기능을 수행하여 활용도를 높일 수 있습니다.

SP8 플랫폼의 어떤 기기든 연구방향에 따라 추후 필요할 시 확장할 수 있습니다.

Top: Versatile platform SP8 (left), Nanoscopy (middle), Super-Resolution (right)
Bottom: CARS (left), Light Sheet (middle), SMD (right)

Alberto Diaspro

Istituto Italiano di Tecnologia (IIT), Genua

“오늘날 다광자 현미경법을 보급하는 데 이상적인 솔루션입니다. 응용 범위의 확대와 다양한 시료와 관련된 수많은 문제의 해결 측면에서 큰 도약입니다. SHG 및 2광자 이미지의 효과적인 통합에 주목할 필요가 있습니다.

STED 모듈을 포함한 다른 Leica 솔루션 및 제품과의 통합 가능성 덕분에 공간 및 시간 해상도에서 형광단에 이르는 다양한 실험 요건을 충족할 수 있습니다. 

후방 초점면을 제어 및 시각화해 2광자 여기 조명 빔을 확대하거나 축소할 수 있다는 사실이 굉장히 마음에 듭니다.”

Sophie Allart

Ingénieur de Recherche
INSERM, Centre de physiopathologie de Toulouse Purpan

“놀라운 것은 기능의 모듈성입니다. NDD 검출기 앞의 필터 큐브 사용이 형광색소의 선택에 영향을 주기 때문에 때때로 시료 전처리를 조정하고 형광색소를 변경해야 하는 경우가 있습니다. 이제 이 과정이 훨씬 더 쉬워질 것이라고 확신합니다.

지금까지 10년 동안 2광자를 다루고 있지만, 4색은 매우 흥미진진한 솔루션입니다.”

Kees Jalink

Netherlands Cancer Institute

"방금 데모를 보았는데 깜짝 놀랐습니다. 가시광선에서 적외선에 이르기까지 모든 기능이 집약되어 있다는 사실이 놀랍습니다. 정말 굉장합니다."

Ron Hoebe

LCAM, van Leeuwenhoek Centre for Advanced Microscopy, University Amsterdam

“새로운 2광자 스펙트럼 검출기가 마음에 듭니다. 가장 마음에 드는 점은 소프트웨어에 내장되어 있는 방식입니다.

이미징 센터를 관리하고 있는데, 사용자가 사용하기 쉬울수록 좋은 장비라고 할 수 있습니다. 매우 복잡한 기계에서 200명 이상의 사용자를 교육하는 일은 쉽지 않습니다.

때문에 더 쉽고 더 직관적일수록 좋습니다.”

Ammasi Periasami

W.M. Keck Center for Cellular Imaging, VA

“740~920 nm 범위의 파장을 설정할 수 있다는 점이 마음에 듭니다. 사용하고자 하는 형광물질에 따라 다양한 파장 개수를 사용할 때 아주 유용한 옵션입니다. 하나의 파장을 사용한 다음 2개 또는 3개의 검출기를 사용하는 등 다양한 옵션이 있어 아주 좋습니다.

신호대잡음비도 매우 우수하고 방출 측면의 유연성도 뛰어납니다.

의심의 여지 없이 시스템의 사용자 친화성은 매우 중요하게 생각하는 요소입니다. 때문에 SP8 DIVE는 제가 찾던 모델입니다. 제가 Leica와 일하면서 1광자 실험에서와 같은 사용자 편의성을 2광자 실험에서도 가질 수 있어 좋습니다."

[Focus on Microscopy 2017에서 있었던 이 시연에서 1개의 IR 레이저와 2개의 스펙트럼 HyD-NDD 검출기가 장착된 SP8 DIVE를 사용해 4개 레벨의 데이터를 순차적으로 획득했습니다. 740nm 여기(배상세포의 점액은 Alexa Fluor 350, 세포핵은 Sytox Green) 920nm 여기(아교질은 SHG, f-Aktin은 Alexa Fluor 568 phalloidin).] 

Marc van Zandvoort

Maastricht University, Genetics and Cell Biology

“기존의 2광자 시스템을 매우 훌륭하게 확장했습니다. 이러한 확장으로 2광자 직접 검출 시스템이 훨씬 더 유연해졌습니다.

지금까지는 별도의 필터가 필요했기 때문에 이러한 사용이 매우 제한적이었습니다. 이 점에서 매우 훌륭한 확장이라고 할 수 있습니다.”

Urs Ziegler

Head of Facility, Center for Microscopy and Image Analysis, University of Zurich

"매우 유연하고 굉장히 사용하기 쉽습니다. 필터를 수동으로 교체할 필요가 없고 가능한 모든 염료를 사용할 수 있습니다.

기본적으로 소프트웨어에서 공초점 스캔 현미경법을 이미 알고 있는 사람을 교육할 필요가 없다는 점이 마음에 듭니다. 필터를 수동으로 교체할 필요가 없습니다. DIVE가 다양한 필터와 염료의 조합을 처리하기 때문에 사용하기 쉽습니다. 이것 자체로도 이미 큰 장점입니다.

또한 생조직에서 다양한 염료를 사용할 수 있는데, SP8 DIVE를 사용하면 아주 쉽게 적용할 수 있습니다. 이것이야말로 큰 발전이라고 생각합니다."