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EM Cryo CLEM은 저희 초저온 워크플로우에서 핵심 요소입니다. 중요한 이 요소를 놓치고 싶지 않습니다.

독일 EMBL 하이델베르크의 전자 현미경 핵심 시설 팀 리더겸 책임자, Yannick Schwab 박사

THUNDER Imager 없이 촬영한 HeLa 세포
THUNDER Imager로 촬영한 HeLa 세포

THUNDER로 관심 영역을 보다 명확하게 식별하고 이미징하세요

세포 구조의 최적화된 시각화를 위해 THUNDER Imager EM Cryo CLEM은 고해상도 초저온 대물렌즈에 라이카마이크로시스템즈의 THUNDER 기술을 결합했습니다. 그 결과 선명하고 흐림 현상 없는 이미지를 획득할 수 있습니다.

THUNDER는 광학 관찰 시 초점이 맞지 않아 흐린 부분을 제거하기 위해 라이카의 혁신적인 Computational Clearing 성능을 사용합니다. 또한, THUNDER Imager EM Cryo CLEM에는 50x / 0.9 NA 대물렌즈도 포함되어 있습니다. 일반적으로 사용되는 원거리 대물렌즈와는 대조적으로  이 렌즈는 유리된 샘플의 고해상도 이미징이 가능하도록 설계되었습니다. 광학 현미경의 속도와 편의성 덕분에 세포 구조의 미세 부분까지 더 자세히 식별하고 시각화할 수 있습니다.

인터랙티브 이미지: Gold Quantifoil R2/2로 코팅된 G200F1 파인더 그리드 위 HeLa 세포.
GFP-TGN46(trans Golgi network) 및 mCherry-Lifeact(F-actin)로 형질전환된 세포입니다. 핵은 Hoechst 33342로 염색되었습니다. 샘플은 영국 런던 프랜시스크릭연구소(Francis Crick Institute)의 Lucy Collinson에 의해 제공됐습니다.

간편하고 재현 가능한 워크플로우

전자 현미경으로 관심 영역을 신속하게 찾아야 할 경우, 관심 영역을 선택하기만 하면 시료를 이동하며 좌표를 내보내기 할 수 있습니다. 직관적인 소프트웨어에서 워크플로우를 안내해주기 때문에 성공적인 EM 연구를 만드는데 필요한 결과를 빠르고 효율적으로 얻을 수 있습니다. 고해상도의 흐림 현상 없는 결과를 위해 THUNDER로 이미지 후처리하세요.

장점:

  • 쉽고 정교한 타겟팅 및 데이터 캡처 - 소프트웨어에서 이미징 워크플로우를 단계별로 안내합니다.
  • 흐림 현상 없는 선명한 이미징 - 관심 영역을 표시하기만 하면 소프트웨어가 자동으로 캡처하고 모자이크 이미지로 정교하게 결합합니다.
  • 고해상도의 선명한 이미지를 위한 THUNDER 후처리
  • 빠르고 재현 가능한 결과 - 실험 설정을 저장하고 온전히 불러올 수 있습니다.
THUNDER Imager EM Cryo CLEM
EM Cryo CLEM을 사용해 EM 그리드 위의 세포를 시각화하고 선택적으로 표시한 형광 이미지.
좌표 표시기를 사용해 Thermo Scientific Aquilos에서 재배치하고 시각화한 동일 세포.

초저온 광학 현미경을 이용한 좌표 전송으로 편한 검색

THUNDER Imager EM Cryo CLEM의 통합 소프트웨어는 이미징 워크플로우를 안내할 뿐만 아니라 클릭 한 번으로 원본 이미지 데이터와 관련 좌표를 내보낼 수 있습니다. 원하는 전자 현미경으로 세포의 목표 영역을 즉시 재배치하고, 시료의 초미세구조 연구를 시작할 수 있습니다.

Thermo Fisher Scientific MAPS EM을 사용해 작업할 경우 당사에서 함께 개발한 Cryo Electron Tomography 워크플로우의 장점도 누리실 수 있습니다. 본 워크플로우는 EM GP2를 사용한 유리화(vitrification)부터 Thermo Scientific Krios™ G3i cryo TEM을 사용한 3D 이미지 재구성까지 완벽한 통합을 보장합니다. 

인터랙티브 이미지: 좌표 선택 및 검색. EM 그리드 위의 세포 형광 이미지를 시각화하고 선택적으로 표시했습니다. 좌표 표시기를 사용해 정확히 같은 세포를 Thermo Scientific Aquilos에서 재배치하고 시각화했습니다.

초저온 환경 유지 

성공적인 실험 결과의 확률을 극대화하기 위해, 고유의 카트리지 시스템과 폐쇄형 초저온 스테이지가 시료의 유리 상태를 유지해줍니다. 이 시스템은 로딩 및 이동 프로세스를 진행하고 있거나 심지어 장시간 이미지를 기록하고 있어도 발생할 수 있는 오염 가능성을 최소화합니다.

작동 방식:

카트리지 시스템(1)으로 시료를 안전하고 신속하게 처리할 수 있습니다. 프레스 및 클립 메커니즘이 시료 처리량을 늘려주고 그리드에서 초저온 스테이지로의 로딩 시간을 단축해줍니다.

셔틀 도킹 스테이션(2)이 최적의 온도를 유지하여 초저온 샘플을 보호합니다. 

대물렌즈 리드와 동기화된 초저온 스테이지(3)가 과압력을 안정적으로 유지하여 시료의 공기 오염을 방지합니다.

트랜스퍼 셔틀을 사용해 그리드 카트리지를 THUNDER Imager EM Cryo CLEM으로 로딩

여러분의 생물학 연구에 따라 적합한 워크플로우를 선택하세요

THUNDER Imager EM Cryo CLEM은 다양한 전자 현미경 워크플로우에 적용할 수 있는 유연한 다목적 솔루션입니다.

여러분의 생물학적 연구 주제에 따라 최적의 워크플로우를 선택하고 필요한 해답을 얻으실 수 있습니다. 생명과학 연구를 위한 워크플로우 솔루션의 자세한 정보는 워크플로우 팸플릿을 다운로드하여 확인하세요.

Cryo CLEM 워크플로우

본 워크플로우로 초저온 절편 시료의 고해상도 초미세구조를 분석할 수 있습니다. 고압으로 시료를 냉동하고 초저온으로 박편합니다. THUNDER Imager EM Cryo CLEM으로 후처리하면 초저온 TEM을 이미징하기 전에 관심 영역을 식별할 수 있습니다. 본 워크플로우는 조직 시료에 적합합니다. 

(1) 고압 냉동 (EM ICE)
(2) 초저온 절편 (EM UC7 / EM FC7)
(3) 관심 영역 식별 (THUNDER Imager EM Cryo CLEM)
(4) TEM에서 이미징

Cryo On-Grid Lamella 워크플로우 - Thermo Fisher Aquilos cryo-FIB SEM 사용

고유한 세포 환경 내 단백질 구조를 분석합니다. 샘플을 낙하 동결하고 관심 영역을 Cryo TEM에서 이미징할 수 있도록 밀링(milling)합니다. 

(1) 낙하 동결 (EM GP2)
(2) 관심 영역 식별 (THUNDER Imager EM Cryo CLEM)
(3) Thermo Fisher Aquilos cryo FIB SEM으로 밀링 및 코팅
(4) TEM에서 이미징

Cryo On-Grid Lamella 워크플로우 - Thermo Fisher Aquilos cryo-FIB SEM 사용

Cryo On-Grid Lamella 워크플로우 (b) - 기타 FIB-SEM 제조사용

고유한 세포 환경 내 단백질 구조를 분석합니다. 샘플을 낙하 동결하고 관심 영역을 Cryo TEM에서 이미징할 수 있도록 밀링(milling)합니다. 

(1) 낙하 동결 (EM GP2)
(2) 관심 영역 식별 (THUNDER Imager EM Cryo CLEM)
(3) 이동 (EM VCM)
(4) 코팅 (EM ACE600 / EM ACE900)
(5) 이동 (EM VCT500)
(6) FIB에서 밀링
(7) TEM에서 이미징 
 

Cryo On-Grid Lamella 워크플로우 - Thermo Fisher Aquilos cryo-FIB SEM 외 기타 FIB-SEM 제조사용

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