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SP8 DIVE Leica Leica Microsystems
Intestino delgado de Camundongo “confetti”. Marcador de linhagem celular. Ciano: CFP, verde: GFP, amarelo: YFP, vermelho: RFP. Pesquisa sobre câncer de cólon. Cortesia de Jacco van Rheenen. Universidade de Utrecht, Holanda.

Aproveite a liberdade espectral com 4Tune

O número de marcadores transgênicos evolui constantemente e rapidamente.  O SP8 DIVE acompanha esses desenvolvimentos e pode se adaptar a marcadores transgênicos novos e existentes com apenas alguns cliques do mouse.

A liberdade espectral resulta da nova tecnologia inovadora 4Tune para detecção não-descaneada. O detector 4Tune permite que você se adapte à emissão total e separe espectros fortemente sobrepostos – sem restauração matemática.

O SP8 DIVE permite que você capture duas vezes mais sinal de fluorescência, algo que se traduz em profundidade de penetração aprimorada, velocidade na aquisição da imagem ou menos fototoxicidade para imagens in vivo.

"Os dicroicos convencionais nunca são ideais para distinguir todos os fluoróforos, porém agora isso é possível e muito mais fácil com os detectores espectrais, já que podemos realmente otimizar o comprimento de onda para cada fluoróforo que queira detectar."

Prof. Dr. Jacco van Rheenen. Universidade de Utrecht, Holanda

Alberto Diaspro

Instituto Italiano de Tecnologia (IIT), Gênova

“Ótimo para a disseminação da microscopia multifóton, nos dias de hoje. É um grande salto em relação ao aumento da variedade de aplicações e à solução de muitos problemas relacionados à variedade de amostras. É importante ressaltar a integração de imagens SHG e de dois fótons de forma efetiva. 

Acredito que a possibilidade de acoplamento com outras soluções e produtos da Leica, incluindo módulos STED, tornará essa arquitetura ajustável para diferentes necessidades experimentais, desde resolução espacial até resolução temporal, fluoróforos e métodos futuros.  

Gosto muito da possibilidade de controlar e visualizar o preenchimento do plano focal posterior da objetiva, de ampliar ou encolher o feixe de iluminação de excitação de dois fótons. É excelente.”

Sophie Allart

Engenheira de pesquisa INSERM, Centro de fisiopatologia de Toulouse Purpan

“É incrível devido à modularidade dos recursos e porque o uso de cubos de filtro na frente dos detectores NDD afetam a escolha dos fluorocromos, e às vezes somos obrigados a adaptar a preparação da amostra e alterar os fluorocromos. Agora será muito mais fácil. 

Não, estou convencida. Tenho trabalhado com dois fótons por 10 anos, têm quatro cores e, portanto, é muito interessante.”

Kees Jalink

Instituto de Câncer da Holanda

"Acabei de receber uma demonstração e estou impressionado. Penso que é realmente maravilhoso e leva qualquer coisa que tínhamos na luz visível agora para o infravermelho. Realmente, uma grande solução."

Ron Hoebe

LCAM, Centro van Leeuwenhoek de Microscopia Avançada, Universidade de Amsterdã

“Eu gosto do novo detector espectral para dois fótons. O que mais gosto é como é incorporado no software.

Estou gerenciando um centro de imagens, e quanto mais fácil for para o usuário, melhor. Temos mais de 200 usuários e treiná-los em máquinas muito complicadas leva muito tempo.

Assim, quanto mais fácil e mais intuitiva for, melhor.”

Ammasi Periasami

Centro de Imagem Celular W.M. Keck, VA

“Eu gosto da configuração de comprimentos de onda de 740 a 920. Essa é uma ótima opção que se pode usar. Quero dizer, quantos comprimentos de onda eles querem usar, dependendo do fluoróforo. E sim, eles usam um comprimento de onda e depois têm dois ou três detectores para aplicar e adaptar, muitas opções. 

A relação de sinal e ruído é muito boa, possui flexibilidade no lado da emissão.

Não há dúvida, é muito importante perceber a facilidade de utilização do sistema. É isso que procuro. Desde que trabalho com a Leica, percebo a facilidade de uso desta operação de dois fótons em relação a operação de um fóton. "

[Durante esta demonstração na Focus on Microscopy de 2017, os dados de 4 marcadores foram adquiridos sequencialmente usando o SP8 DIVE equipado com um laser IV e dois detectores espectrais HyD-NDD. Excitação de 740 nm (Alexa Fluor 350 para muco de células caliciformes, Sytox Green para núcleos celulares) 920 nm de excitação (SHG para colágeno, Alexa Fluor 568 de falaoidina para f-Aktin).]

Marc van Zandvoort

Universidade de Maastricht, Genética e Biologia Celular

“Uma extensão muito boa dos sistemas atuais de dois fótons existentes. Esta extensão torna o sistema muito mais flexível no uso dos detectores diretos para dois fótons. 

Até agora, esse uso era muito limitado, devido à necessidade de filtros separados. Nesse sentido, é uma excelente extensão.”

Urs Ziegler

Chefe da instituição, Centro de Microscopia e Análise de imagens, Universidade de Zurique

"É muito flexível e muito fácil de usar. Você não precisa alterar os filtros manualmente e pode usar todos os marcadores que consegue imaginar. 

O que eu mais aprecio é que, basicamente, no software você não precisa treinar alguém que já conheça a microscopia de varredura confocal. Você não precisa alterar os filtros manualmente - o DIVE é fácil de usar porque cuida das diferentes combinações de filtros e marcadores, o que, embora seja possível, não é tão fácil de fazer. Então, isso já é uma grande vantagem.

E, obviamente, no tecido vivo há vários marcadores que podem ser usados, segundo e terceiro harmônicos. Ao usar o SP8 DIVE, isso pode ser feito muito, muito facilmente. Acho que este é um grande passo para o futuro."

Utilize o DIVE com facilidade – O Detector 4Tune

O detector não-descaneado 4Tune pode ser equipado com 2 à 4 unidades de detecção e é configurável livremente com fotomultiplicadores (PMTs), detectores híbridos (HyDs), ou uma combinação de ambos. A luz de emissão é separada por uma combinação de dicroicos variáveis e filtros de banda estreita. O ajuste varia entre 380 e 800 nm de comprimento de onda.

A interface de usuário de 4Tune permite otimizar a configuração da emissão para múltiplos marcadores transgênicos com simples arrastar e soltar do mouse. Devido ao seu design claro e intuitivo, operá-lo é fácil e requer treinamento mínimo.

Com o SP8 DIVE, você fica equipado para todos os marcadores transgênicos existentes e para novos marcadores desenvolvidos, e aprovados no futuro para novos desenvolvimentos!

Top graph: Rapid increase of markers
Bottom: Interface intuitiva do usuário 4Tune
Perna de camundongo. Fibra muscular marcada com Rab5-GFP. IRAPO 40x 1.1. Esquerda: Melhor resolução. Direita: Penetração profunda. O uso da configuração de penetração profunda aproximadamente duplica o brilho. Como consequência, a profundidade de penetração aumenta. Cortesia do Prof. Rudolf, Universidade de Ciências Aplicadas, Mannheim.

Explore novas dimensões em profundidade

Com o SP8 DIVE, você pode ajustar seus experimento para obter a visão mais profunda e os melhores detalhes. Todos os feixes de excitação podem ser ajustados de forma otimizada e independente para qualquer objetiva usando o novo expansor de feixes Vario (VBE).

O VBE permite uma colocalização otimizada e o correto equilíbrio entre resolução e profundidade de acordo com a sua necessidade de pesquisa.

Otimize para obter profundidade e resolução com o expansor de feixes Vario

O expansor de feixes Vario VBE da Leica combina diâmetro de feixe e divergência ajustáveis. Esta tecnologia permite que você alcance profundidade máxima, melhor resolução e completa correção de cor.

Diâmetro de feixe ajustável para melhor equilíbrio de resolução e profundidade

Você pode escolher individualmente o melhor equilíbrio entre resolução e entrada de energia ajustando o diâmetro do feixe. Quando amplia o feixe, obtém iluminação homogênea do plano focal posterior da objetiva. Se for usado em combinação com uma grande abertura numérica, a resolução máxima será alcançada.

O estreitamento do feixe permitirá uma maior entrada de energia no volume focal, resultando em uma melhor penetração da amostra e imagem mais profunda. Com o VBE, você pode ajustar os feixes de forma independente, para até quatro comprimentos diferentes de onda IV (infravermelha), para encontrar o melhor equilíbrio entre resolução e profundidade (imagem superior).

Divergência de feixe ajustável para correção de cor completa

A introdução de uma divergência de entrada corrige as diferenças axiais de cor  de comprimentos distintos de onda IV. Isso permite que você estimule no mesmo ponto focal do espécime até quatro comprimentos de onda IV (imagem inferior).

Expansor de feixes Vario VBE
Tíbia de camundongo. Músculo estriado. Análise morfológica do desenvolvimento da junção neuromuscular.
Verde: GFP – Rab 5 (GTPase, endossomos). Vermelho: mCherry – Bif 1. Cinza: AF647- Alfa-bungarotoxina (NMJ). Amostra de cortesia do Prof. Rudolf, Universidade de Ciências Aplicadas, Mannheim.

Resultados reprodutíveis de imagens in vivo profundas e em múltiplas cores

Excitação em múltiplas cores: Estimule múltiplos marcadores transgênicos em um único experimento com uma separação de cores perfeita. Ou faça ainda uma fotomanipulação localizada de alta precisão e uma imagem simultânea em um volume limitado por difração. O SP8 DIVE pode ser equipado com até três linhas de excitação ajustáveis simultaneamente, balanceadas por modulação ótica acústica. Uma vez que os lasers são ajustáveis até 1300 nm, você pode usar marcadores vermelhos e vermelho-longos para experimentos multifóton. Menos dispersão permite uma penetração mais profunda e resulta em imagens brilhantes, cheias de detalhes, provenientes de camadas profundas da amostra.

TuneIR – Condições de instrumento sempre perfeitas permitem percepções decisivas: Para se obter resultados reprodutíveis e precisos a todo momento, condições confiáveis e estáveis de instrumentos e feixes de laser IV são primordiais. Para isso, combinamos uma nova unidade de coletor de feixes com nosso expansor de feixes Vario. Nós garantimos que você obtenha condições de imagem reprodutíveis e perfeitas para até três linhas de excitação ajustáveis e colocalização perfeita de múltiplos marcadores.

Versatilidade e proteção de investimento

O SP8 DIVE baseia-se na plataforma versátil SP8.

A linha completa de SP8 pode ser combinada com o DIVE, da microscopia confocal com super resolução á nanoscopia STED.

Expanda a plataforma sempre que precisar – seguindo a direção de sua pesquisa – agora e no futuro.

top: Versatile platform SP8 (left), Nanoscopy (middle), Super-Resolution (right)
bottom: CARS (left), Light Sheet (middle), SMD (right)