Microscopie corrélative CLEM
Imaginez que vous puissiez facilement jeter un pont entre les échelles micrométrique et nanométrique, en reliant les informations fonctionnelles et ultrastructurales. Pour une étude spécifique, cela implique l’utilisation de différentes techniques de préparation d’échantillons et de microscopie pour associer plusieurs méthodes, telles que l’imagerie des cellules vivantes, la congélation à haute pression, l’ultramicrotomie et la microscopie électronique (cryo). Une approche CLEM permet de combler cette lacune.
Les solutions CLEM de Leica Microsystems garantissent la viabilité des échantillons, les contrôles de qualité et un mécanisme de ciblage 3D précis et fiable. Les utilisateurs peuvent tirer parti de ces solutions pour identifier directement la bonne cellule au bon moment, obtenir des données cryogéniques confocales haute résolution ou placer les informations de fluorescence dans le contexte ultrastructural.
Nos experts en solutions pour la microscopie optique et électronique corrélative sont à votre disposition pour vous conseiller.
À quoi sert la CLEM ?
Une approche CLEM est utilisée afin d’approfondir l’étude d’un échantillon avec une résolution inférieure au nanomètre, ce qui permet non seulement la combinaison de différentes couches d’informations d’une région, mais aussi le ciblage spécifique d’une région d’intérêt dans la masse. C’est un peu comme avoir un phare lorsqu’on évolue dans l’obscurité.
Par exemple, une protéine marquée peut facilement être détectée et ciblée par cryomicroscopie de fluorescence pour, ensuite, analyser plus en détail sa structure à l’aide de la cryo-EM (en savoir plus sur Coral Cryo). De même, vous pouvez, par exemple, combiner des informations dynamiques (p. ex. les interactions intercellulaires) avec des informations structurelles et dépasser la limite de résolution de la lumière (en savoir plus sur Coral Life).
Cependant, aussi simple que cela puisse paraître, la mise en place d’un workflow CLEM fluide et performant (cryo) pose de nombreuses difficultés. Dès le stade de la conception expérimentale, les utilisateurs doivent envisager de répondre aux questions suivantes :
- Comment préparer et maintenir l’échantillon dans un état optimal ?
- Comment identifier et marquer les structures d’intérêt ciblées ?
- Comment transférer l’échantillon de manière sûre et efficace entre les instruments ?
- Comment fournir les images et les coordonnées dans un format approprié pour les étapes EM ultérieures ?
La gamme Coral vous permet de traiter votre échantillon, étape par étape, en garantissant un workflow CLEM plus fiable.
Comment les données CLEM sont-elles corrélées ?
La corrélation entre la microscopie électronique et optique est cruciale pour réussir les expériences, que ce soit à température ambiante ou cryogénique. Les systèmes de coordination doivent être établis et bien reconnus avec différentes méthodes d’imagerie. Les informations sont ensuite superposées soit par ajustement de l’image (pour les vues d’ensemble), soit par coordination absolue des positions (valeurs x, y et z) pour récupérer des informations très résolues et précises.
Qu’est-ce que la CLEM cryo ?
En CLEM cryo (microscopie optique et électronique corrélative), les deux étapes d’imagerie sont réalisées dans des conditions cryogéniques, ce qui implique la nécessité d’un workflow de préparation d’échantillons cryogéniques fiable. Cela inclut la vitrification fiable des échantillons, un transport sécurisé et une imagerie optique cryogénique stable. Une attention particulière doit être accordée à la contamination par la glace : des environnements très humides et de l’azote liquide LN2 impur peuvent facilement compromettre votre échantillon. Avec Coral Cryo, vous bénéficiez des avantages suivants : 1) une manipulation sûre et propre de vos échantillons ; 2) une imagerie optique cryo stable sur le long terme ; et 3) une imagerie et un ciblage précis des biomolécules dans leur environnement natif à l’aide du logiciel Coral Cryo.
Présentation du workflow Coral Life
L’imagerie par fluorescence des cellules vivantes est un moyen largement utilisé pour visualiser les processus cellulaires au fil du temps. Cependant, dans certains cas, les informations obtenues par microscopie optique ne suffisent pas à fournir des informations sur les mécanismes cellulaires. Dans ce cas, une image d’ultrastructure absolue haute résolution fournie par (RT) EM est nécessaire.
Le workflow Coral Life de Leica Microsystems vous permet de suivre et d’obtenir des images d’événements cellulaires rares au fil du temps à l’aide de la microscopie par fluorescence dans un environnement physiologiquement sûr. Une fois que l’événement d’intérêt a eu lieu, vous pouvez vitrifier votre échantillon en seulement cinq secondes pour une analyse plus approfondie dans un RT EM (MET, MEB, FIB/MEB).
Il simplifie le transfert d’échantillons depuis les environnements de culture cellulaire soigneusement entretenus jusqu’à l’imagerie par fluorescence et la vitrification rapide par congélation à haute pression. Le workflow Coral Life, de la cellule vivante à la vitrification, permet de capturer les événements rares lorsqu’ils se produisent au niveau des cellules, les rendant analysables par EM.
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