Microscopía de fluorescencia

La fluorescencia es uno de los fenómenos físicos más utilizados en microscopía biológica y analítica, sobre todo por su alto grado de sensibilidad y especificidad. La fluorescencia es una forma de luminiscencia.

La microscopía de fluorescencia incluso permite a los usuarios determinar la distribución de una sola especie de molécula, su cantidad y su ubicación dentro de una célula. Se pueden realizar estudios de colocalización e interacción, y se pueden observar las concentraciones de iones y procesos intra y extracelulares como la endocitosis y la exocitosis. 

Gracias a la microscopía de fluorescencia con superresolución, incluso es posible captar imágenes de estructuras con subresolución.

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Microscopios ópticos de fluorescencia

Los microscopios de fluorescencia que se emplean en aplicaciones de investigación se basan en una serie de filtros ópticos:

  • un filtro excitación
  • un divisor de rayos dicroico
  • un filtro de emisión.

Los filtros suelen estar insertados en un bloque de filtros (microscopios compuestos) o en un soporte plano (sobre todo en microscopios estereoscópicos). 

Mientras que el filtro de excitación selecciona las longitudes de onda que excitan un fluoróforo concreto dentro de la muestra, el filtro de emisión actúa como una especie de control de calidad, ya que solo permite pasar las longitudes de onda de interés emitidas por el fluoróforo. La función del espejo dicroico es reflejar luz en la banda de excitación y transmitir luz en la banda de emisión, lo que permite la iluminación clásica de luz incidente para epifluorescencia.

Este tutorial de fluorescencia explica los elementos ópticos de la trayectoria de luz y el funcionamiento de la microscopía de fluorescencia, tomando como ejemplo un microscopio invertido que se puede utilizar para métodos de contraste con diascopía y para microscopía de fluorescencia.

Software de microscopía LAS X
Software de microscopía LAS X
Microscopios estereoscópicos de fluorescencia Leica M165 FC & M205 FA
Microscopios estereoscópicos de fluorescencia

Microscopios estereoscópicos de fluorescencia

Los microscopios estereoscópicos de fluorescencia de Leica Microsystems utilizan la tecnología TripleBeam, una (tercera) trayectoria de rayos independiente para la iluminación de fluorescencia de la muestra sin espejo dicroico.

Por tanto, se necesitan un filtro de excitación para la trayectoria de rayos de iluminación y dos filtros de emisión, uno para cada trayectoria de rayos de observación.

Leica Microsystems FluoScout: saque el máximo partido a su microscopio de fluorescencia

Para obtener resultados excelentes en la adquisición de imágenes en microscopía de fluorescencia, la fuente de luz, los fluoróforos y los cubos de filtros deben combinarse a la perfección. FluoScout le permite seleccionar el bloque y el juego de filtros adecuados para maximizar la eficacia de excitación y emisión de sus contrastes fluorescentes o proteínas fluorescentes.

  • Seleccione la fuente de luz, los fluoróforos y el bloque de filtros por separado.
  • Obtenga una recomendación de bloques de filtros en función de los fluoróforos elegidos.
  • Adquiera espectros haciendo clic en el carro de la compra y reciba ofertas relacionadas con sus juegos de filtros.

Acceso a FluoScout

Leica Microsystems FluoScout™: Encuentre el mejor cubo de filtros para sus necesidades

Leica FluoScout™: Añadir fluoróforos

Absorción de datos, emisión de belleza

Para adquirir imágenes de fluorescencia hay que utilizar la cámara de fluorescencia CCD o sCMOS adecuada. Leica Microsystems ofrece cámaras de fluorescencia específicas para todas las aplicaciones. Cada cámara ofrece la combinación perfecta de sensibilidad y calidad de imagen, lo que garantiza unos resultados excelentes.


Absorción de complejidad, emisión de sencillez

La facilidad para configurar el equipo y controlar los experimentos está adquiriendo cada vez más importancia en la microscopía de fluorescencia. La plataforma específica de software Leica Application Suite (LAS) X facilita la configuración incluso de experimentos complejos. LAS X guía al usuario desde la configuración hasta el análisis de los datos de la imagen, y es la plataforma de software perfecta tanto para llevar a cabo análisis multicanal sencillos como análisis complejos en 3D.