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FLIM-FRET으로 분자 상호작용 추적하기

현대의 연구는 분자가 생명 활동을 하기 위해 어떻게 상호작용하는지를 조사합니다. FLIM-FRET은 이러한 상호작용을 탐색하는 최적의 표준입니다.

STELLARIS 8 FALCON은 FLIM 장비에 새로운 속도 표준을 설정합니다.

이를 통해 고도로 동적인 세포 이벤트에서 FRET을 사용할 수 있습니다. 일상적인 실험에서 FRET 데이터를 촬영하고 해석할 수 있습니다.

EPAC mT2-dVenus FRET 센서를 나타내는 HeLa 세포의 케이징된 cAMP입니다. EPAC가 UV 매개 cAMP 언케이징(중앙 영역)에 반응합니다. 4 fps로 녹화한 동영상입니다. 이미지 크기: 256 x256 픽셀. 색상 막대 척도(수명): ns. 제공: Kees Jalink, Bram van den Broek, NKI Amsterdam.

트롬빈 활성화 펩타이드로 자극한 후에 일어난 칼슘 오실레이션입니다. 개별 세포의 반응은 수명 변화로 기록됩니다. 4 pfs로 촬영한 동영상입니다. 이미지 크기: 256 x 256 픽셀. 색상 막대 척도(수명): ns. 제공: Kees Jalink, Bram van den Broek, NKI Amsterdam.

바이오센서로 빠르게 나타나는 미묘한 변화를 모니터링하세요

바이오센서는 대사 활동, 신호 메커니즘, pH 및 미세 환경 변화에 대한 강력한 리포터입니다.

STELLARIS 8 FALCON은 세포막 전위 역학 같은 초고속 이벤트에서도 형광 수명에 포함된 정보에 액세스할 수 있습니다. 이 정보는 STELLARIS 8 시스템에서 제공하는 스펙트럼 형광 강도 이미징 및 TauSense 모드를 보완합니다.

보다 안정적이고 민감한 대사 이미징

기존 이미징에서는 자가발현형광이 문제가 될 수 있습니다. STELLARIS 8 은 자가발현현광을 가치 있는 정보로 바꿉니다. 이제 자가발현형광을 대사 상태, 세포 분화, 암 발달에 대한 리포터로 변환할 수 있습니다.

또한 형광 라벨링이 종종 구체적이지 않거나 생리학적 조건이 파괴되는 살아있는 조직에서도 STELLARIS 8  FALCON으로 이미징 콘트라스트를 할 수 있습니다.

비생리학적 조건(pH 8.5)에서 포유류 세포의 자가발현형광입니다. 이 신호는 NAD/NADH 세포내 저장의 변화와 상관 관계가 있습니다. 산화 스트레스의 발달은 시간이 지남에 따라 형광 수명의 감소로 나타납니다. 원본 이미지 크기: 512 x 512 픽셀. 색상 막대 척도(수명): ns.
강도
FLIM

스펙트럼 옵션 이상의 형광단 분리

형광 라벨링은 세포 내 구조를 구별할 수 있는 표준적인 방법입니다. 스펙트럼 분리는 매우 강력하지만, 방출 스펙트럼이 너무 가까울 때는 제한적일 수 있습니다.

STELLARIS 8 FALCON은 형광 수명 이미징의 잠재력을 최대한 활용하여 지수 피팅, 패턴 피팅 및 새로운 FLIM 페이저 분리 분석을 사용하여 여러 형광 프로브를 분리할 수 있습니다.

인터랙티브 이미지: 세포골격 구조는 수명 콘트라스트로 구별됩니다. Alexa Fluor 555(초록색)으로 면역 표지된 비멘틴, Alexa Fluor 546(파란색)으로 면역 표지된 튜블린입니다. 형광단은 놀라울 정도로 매우 유사하지만, 형광 수명 정보를 사용하여 분리됩니다. 이미지 크기: 512 x 512 픽셀.

신속한 수명 이미징을 위한 STELLARIS 8 FALCON

STELLARIS 8 FALCON 현미경은 FLIM의 속도 제한을 극복하여 수명 데이터를 신속하게 제공할 수 있습니다.

지금까지는 FLIM의 기술적 제약으로 인해 고속 공정의 형광 수명 데이터에서 추출한 기능 정보를 얻기 어려웠습니다. FLIM 촬영 속도는 공초점 강도를 기록하는 것보다 10배 이상 느렸습니다.

이제 STELLARIS 8 FALCON의 신속한 수명 콘트라스트 이미징을 사용하여 적절한 속도로 세포의 동적 과정을 추적할 수 있습니다. 데이터 처리 및 분석을 위한 지능형 알고리즘과 함께 TCSPC(Time-Correated Single Photon Counting)를 사용하여 시간을 측정하는 새로운 방법 덕분에 이러한 작업이 가능해졌습니다.

Nature의 애플리케이션 노트: SP8 FANCE: 동영상 속도의 공초점 FLIM을 지원하는 형광수명 이미징의 새로운 개념입니다

Alexa Fluor 555(초록색)가 들어 있는 용액 속의 형광 비드(자홍색)의 단일 채널 이미지입니다. 형광 수명에 기반한 형광단은 다양한 속도에서 가능합니다. 예를 들어, 16fps(상단), 27fps(동영상 속도, 중간), 83fps(초고속, 하단)입니다. 염료 분리에 수명 정보를 사용하는 것이 강도(그레이스케일)보다 훨씬 유리합니다. 동영상은 수명 성분의 픽셀 단위 피팅을 보여줍니다. 프레임 크기 512 x 64 픽셀. 스케일바: 10 µm.
복잡한 샘플을 직관적으로 촬영합니다. 190메가픽셀이 포함된 722개의 타일로 이뤄진 고해상도 쥐 배아 모자이크 이미지입니다. FLIM 데이터에는 색상으로 구분되는 네 종류의 형광 수명이 있습니다. 촬영: 1시간 23분. 분석: 1시간 00분

올인원 멀티모달 이미징

지금까지 STELLARIS 8 FALCON만큼 FLIM을 다른 촬영 장비들과 결합하기 쉬운 방법은 없었습니다. 지금까지 연구자들은 복잡한 배선 작업과 번거로운 파일 전송 작업을 처리해야 했습니다. STELLARIS 8 FALCON을 사용하면 수명 정보를 표준 공초점 워크플로에 통합할 수 있습니다.

STELLARIS 8 FALCON은 LAS X 촬영 및 분석 소프트웨어에 완벽하게 통합되어 있습니다. 이는 FLIM을 4개의 스펙트럼 채널에서 동시에 또는 최대 10개의 채널에서 순차적으로 녹화할 수 있습니다. STELLARIS 8 FALCON으로 3D-스택, 타임 랩스 시퀀스 그리고 심지어 큰 모자이크 타일 형식의 수명 콘트라스트에 액세스할 수 있습니다.

 LAS X NAVIGATOR를 사용하면 관찰 영역을 최대 10,000배까지 확장하여 관심 영역을 식별하고 완전히 새로운 방식으로 샘플을 탐색하는 데 드는 시간을 절약할 수 있습니다.

페이저로 직관적인 형광 수명 정의

FLIM 페이저를 사용한 STELLARIS 8 FALCON 을 활용해 분석하여 형광 수명 구성 성분을 2D로 시각화할 수 있습니다. FLIM 페이저를 사용하면 미세 환경 변경 사항을 확인하고, 신호를 멀티플렉싱할 성분을 선택하며 FRET 효율성을 결정할 수 있습니다.

Alexa555-Palloidin 및 H2B mCherry로 라벨링된 세포. FLIM 페이저를 사용해 분리를 수행했습니다. 이 페이저 시각화는 두 가지 분포를 분명하게 보여줍니다. 제공: Dr. Martin Stöckl, Department of Biology, University Konstanz, Germany. 
실험에 집중하도록 도와드리는 원클릭 철학: STELLARIS 8 FALCON은 LAS X 소프트웨어에 의해 제어됩니다.

클릭 한 번으로 필요한 결과를 얻으세요

LAS X 소프트웨어를 사용하면 클릭 한 번으로 FLIM을 일상적인 스펙트럼 이미징처럼 사용할 수 있습니다.

현미경을 보완적 기법으로 사용하더라도 필수 요소를 찾아 바로 이미징을 시작할 수 있습니다.

워크플로로써 보다 전문화된 기능에 액세스할 수 있으며 사용자의 편의를 위한 자동화를 지원합니다.

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