연구에 다양성을 추가하세요

DLS로 STELLARIS 5 또는 STELLARIS 8 시스템을 보완하면 연구 범위가 더욱 다양해지며, 직관적인 샘플 처리 및 다중 위치 실험을 통해 여러 종류의 샘플을 3차원으로 쉽게 이미징할 수 있습니다.

DLS 모듈은 라이브 셀 이미징 애플리케이션을 향상하기 위해 설계된 제품으로, sCMOS 카메라로 단일 평면 조명 및 빠른 이미징을 통해 세포의 생존 능력을 높입니다. DLS를 사용하면 살아있는 표본 외에도 투명한 샘플도 이미지화할 수 있어 연구 목표에 도달하는 데 필요한 더 많은 유연성을 제공합니다.

수직 회전 – 어떻게 광시트를 공초점에 적용할 수 있을까요?

광시트 현미경은 일반적으로 조명 및 대물렌즈가 서로 직각을 이루는 독립적인 시스템에서 전용 광학 설정이 필요합니다. DLS를 사용하면 광시트 현미경 검사가 더욱 쉬워집니다. 고유한 TwinFlect 미러 장치는 90도 각도로 조명 광시트의 방향을 바꿉니다. 이러한 개선을 통해 조명 및 감지 빔 경로를 반전된 현미경 스탠드가 있는 STELLARIS 시스템의 수직 축으로 통합할 수 있습니다. 공초점 기능을 저하시키지도 않습니다.

3D로 촬영한 낮은 광독성 및 샘플 이미징: 6시간에 걸친 노랑초파리의 발달. 프로브: 광민감 RFP. 3D 렌더링. 150µm z 스택, 30초/스택.

장기 관찰을 수행하고 문서화하세요

이미징에는 조명이 필요하지만 조명이 강하면 세포가 손상될 수 있습니다. 광시트 현미경은 광독성 및 표백으로 인한 전반적인 광손상을 줄여주는 현재까지 가장 부드러운 이미징 방법입니다. 이러한 방법을 통해 표본의 생존 능력이 자동으로 높아집니다. 특히 발달 생물학은 광시트 이미징의 장점이 최대화되는 분야입니다. 저광 조명과 고속 촬영의 결합을 통해 초파리 배아와 같이 민감하고 성장하는 유기체를 장시간에 걸쳐 추적하고 실시간 및 3D로 조직과 기관의 형성 방식을 이해할 수 있습니다.

광시트 이미징의 원리

광시트 현미경은 단일 평면에서만 표본을 밝혀 민감한 샘플을 이미징하거나 생물학적 공정을 가속화하는 매우 적합한 방법입니다.

포커스를 벗어난 여기 부피가 없기 때문에 광독성 효과를 초점면으로 낮출 수 있습니다. 또한, 표본이 광시트를 통과하면 광학 절편이 자동으로 생성되고 3D로 표본을 이미징할 수 있습니다.

고속 이미징: 제브라피시 심박동, 유전자 변형 라인 flik1:: EGFP. xytz 녹화 후 사후 촬영 조정. 녹화 속도: 120프레임/초. 제공: Emily Steed, Vermot Lab, IGBMC Strasbourg, France.

뛰어난 해상도로 빠른 이미지 촬영

제브라피시 심박동 같은 빠르고 주기적인 생물학적 과정을 장시간 관찰하는 것은 올바른 이미지 속도와 해상도가 없으면 어려울 수 있습니다. DLS 모듈을 사용하면 탁월한 해상도로 신속한 이미지 촬영에 적합한 두 가지 최첨단 sCMOS 카메라 중에서 선택할 수 있으며, 두 카메라 모두 LAS X Lightsheet Wizard에 완전히 통합됩니다.

3D로 배양된 유선 상피세포 마이크로 스페로이드를 7.5시간 녹화한 영상입니다. 데이터 제공: intelligent imaging group (B. Eismann/C. Conrad) at BioQuant/DKFZ Heidelberg

한 번에 다양한 위치에서 3D 세포 배양을 관찰하세요

오가노이드 또는 스페로이드 같은 세포 배양을 효과적으로 3D로 이미징하기에는 그 큰 부피 때문에 새로운 어려움에 직면합니다. 오가노이드는 클리어링 기법을 사용하여 수정, 면역 표지 및 연구할 수 있으며 또한 동적 과정을 연구하는 데도 활용할 수 있습니다. 사전 정의된 워크플로우 덕분에 DLS로 이러한 샘플을 간단하게 조사 가능하며, 이로써 세포 및 분자 프로세스에 대한 중요한 정보도 얻을 수 있습니다. DLS는 부착세포에서 2D 세포 배양을 하는 것에 비해 생리학적으로 보다 관련성 높은 조건에서 3D 세포 배양을 연구할 수 있으므로 투명하고 살아있는 표본 요건을 충족합니다.

Digital Light Sheet 현미경을 사용한 전체 3D Cell Biology Workflow 를 알아보세요.

살아있는 투명한 샘플을 위한 광시트 시스템

심층 조직을 현미경으로 관찰하는 작업은 생물학적 조직의 투명도로 인해 쉽지 않습니다. 이로 인해 조직 클리어링 프로토콜이 점점 더 많아지고 있지만 수많은 이미징 시스템에서는 적용이 쉽지 않습니다.

DLS 모듈은 살아있는 샘플에 대한 뛰어난 결과를 제공할 뿐만 아니라 다양한 클리어링 기법을 적용한 샘플을 이미지화할 수 있습니다. DLS를 사용하면 투명한 조직 및 유기체의 섬세한 구조를 시각화할 수 있는 여러 가지 대물렌즈와 장착 프레임 중에서 선택이 가능합니다.

동영상 촬영 조건:

  • 감지 대물렌즈 HC APO L10x/0.30 W DLS
  • 이미지 크기: 1.39mm x 2.04mm (2x3 타일)​
  • Z 스택:1.5mm 두께 (2um 스텝 크기, 745 프레임)​
  • 촬영 속도: 5분 37초​
  • 여기:514nm
  • 방출: LP514nm 롱 패스, 6msec 노출 시간​

SeeDB로 클리어링된 성체 Thy1-YFP-H 쥐 뇌 조각의 대뇌 피질과 해마입니다. 이미지 제공: Dr. Meng-Tsen Ke and Dr. Takeshi Imai, RIKEN Center , Kobe, Japan.

이 사례는 DLS와 결합된 공초점의 장점을 보여줍니다. 면역 반응에 관련된 대식세포를 시각화하기 위해 유전자 변형 제브라피시 배아를 라벨링했습니다. 상처 치료 시의 행동을 조사하기 위해 공초점 레이저를 사용하여 상처(화살표)를 생성한 후 타임랩스 동영상을 녹화했습니다. 이 동영상은 이제 상처에서 치료 프로세스를 시작하는 활성 세포의 동적 반응을 보여줍니다. 이 경우 DLS로 전환하면 제브라피시의 살아있는 세포를 부드럽게 이미징할 수 있습니다. 

다양한 추가 애플리케이션이 주는 이점

라이카의 광시트 모듈은 공초점에 기능을 추가해주는 것 이상의 이점을 제공합니다. STELLARIS 및 DLS의 시너지 효과를 통해 연구의 옵션을 확장할 수 있습니다. 예를 들어, 공초점 기술을 사용하여 표본을 조작한 다음 DLS로 이미징할 수 있습니다.

LAS X 소프트웨어의 공초점 모드와 광시트 모드 간에 전환하기만 하면 됩니다. 이러한 방식으로 장기간 섬세한 관찰이 필요한 광변환 또는 상처 실험을 쉽고 편리하게 수행할 수 있습니다.

익숙한 샘플 준비

DLS의 수직 실험 설정 덕분에 익숙한 방식으로 샘플을 준비할 수 있습니다. 표본을 기존 유리 하단 페트리 접시에 장착하여 직접 접근할 수 있습니다. 다양한 위치의 실험에서 여러 샘플을 선별할 수도 있습니다. 공초점 스테이지 자동화를 활용하여 하나의 실험 환경에서 여러 표본을 이미지화할 수도 있습니다. 한 가지 전제 조건은 무엇일까요? TwinFlect 미러를 위해 표본의 각 측면에 약간의 공간을 두어야 합니다.

DLS용 샘플 준비. 표본은 유리 하단 페트리 접시의 배양액 안에 끼워 넣습니다. 과도한 배양액은 제거하여 TwinFlect 미러를 위한 공간을 만들어야 합니다.

추가 샘플 처리 도구

샘플 장착 시 U자형 유리 모세관 사용하기

U자형 유리 모세관은 두 가지 크기로 제공됩니다. 두 가지 U자형 유리 모세관으로 다양한 TwinFlect 미러에 맞게 선택할 수 있고, 샘플 배치 시 최적의 스캐폴드로 사용할 수 있습니다. 
추가 정보

DLS 샘플 장착 시 회전 장치 사용하기

굴절률 1,338의 FEP 튜브는 수용액에 담긴 샘플을 장착하는 데 종종 사용됩니다. 샘플을 이미징에 최적으로 조정하기 위해 관찰 각도를 조정할 수 있는 회전 장치를 설계했습니다.
추가 정보

샘플 준비 시 장착 프레임 사용하기

여기에 표시된 라이카 장착 프레임은 DLS 이미징에 필요한 샘플 준비에 큰 이점을 제공합니다. 이를 통해 많은 수의 표본을 준비할 수 있으며 BABB(벤질 알코올 벤조에이트)와 같은 잠재적으로 유해한 시약도 함께 사용할 수 있습니다.
추가 정보

장착 프레임 세트 (샘플 홀더 직사각형 24x50mm + 30mm 직경의 샘플 홀더 라운드)

공초점의 이점을 제공하는 광시트

DLS과의 원활한 통합 덕분에 광시트 이미징 시 STELLARIS 시스템의 기술적 혁신의 이점을 누릴 수 있습니다. 

언제나 적합한 레이저 사용

STELLARIS 공초점의 모든 가시 레이저는 광시트가 있는 이미징에 사용할 준비가 되어 있습니다. 옵션용 다이오드 레이저 라인과 STELLARIS 차세대 White Light Laser를 사용하면 광시트 실험에 적합한 올바른 염료를 선택할 수 있는 높은 유연성을 누릴 수 있습니다. 이제 STELLARIS 8로 근적외선 염료의 이미징을 이용할 수 있습니다.

언제나 적합한 스캐너 사용

탠덤 스캐너가 장착된 STELLARIS 시스템을 사용하면 공명 스캐너 또는 시야 스캐너(1400Hz에서) 사이에서 선택하여 광시트 스캔을 생성할 수 있습니다.    공명 스캐너를 사용하여 광시트를 생성하면 픽셀 유지 시간이 짧아지므로 더욱 부드러운 이미징을 수행하는데 유용합니다.

워크플로우 지향적인 소프트웨어 설계

LAS X 소프트웨어는 데이터 녹화 및 평가 시 단계별로 사용자를 안내합니다. 워크플로우 지향적인 설계 덕분에 기기를 보다 효율적으로 사용할 수 있습니다. 편리한 보정 루틴으로 광시트를 정밀하게 설정합니다.

샘플의 양면 조명이 설계에 도입되었습니다. TwinFlect의 서로 마주보는 두 개의 미러는 스캐너로 표적화되어 어두운 영역도 극복할 수 있습니다. 넓은 시야의 선명한 이미지의 경우, LAS X 소프트웨어의 Lightsheet Wizard의 온라인 또는 오프라인 융합 옵션을 사용하여 두 이미지를 통합할 수 있습니다.

추가 소프트웨어 패키지로 LAS X를 필요에 맞게 조정하세요. LAS x 3D 시각화 모듈은 직관적 클리핑, 신속한 렌더링 및 스테레오 디스플레이를 사용하여 새로운 방식의 3D 데이터 상호 작용을 제공합니다. 타일 스캐닝 실험을 통해 넓은 영역을 관찰할 수 있습니다. 표시 및 찾기 실험으로 다중 위치 설정에서 여러 관심 영역을 관찰할 수 있습니다.

최상의 광학

광범위한 응용 분야에 적합한 우수한 대물렌즈는 라이카마이크로시스템즈의 특징 중 하나입니다.  광시트를 수직으로 회전시키는 라이카 시스템의 핵심은 대물렌즈 및 TwinFlect 미러 장치로 이루어져 있습니다.  

다양한 조명 대물렌즈를 선택할 수 있어, 실험 요건에 따라 광시트를 구성할 수 있습니다.

가장 디테일한 부분까지 관찰하거나 보다 큰 시야를 확보하거나 이미징 매체의 굴절률을 조정하기 위해 다양한 옵션 중에서 최적의 감지 대물렌즈를 선택할 수 있습니다.  

대물렌즈 살아있는 세포 이미징 설탕 기반 클리어링 시약 BAAB 클리어링 호환
FLUOTAR L 25x/0.95 W  아니요 아니요
APO L 20x/0.5 W 아니요 아니요
Fluotar L 16x/0.6 IMM
APO L 10x/0.3 아니요
5x/0.15 IMM

편리한 데이터 처리

장기간 3D로 관찰하는 공정은 다량의 데이터를 생성합니다. LAS x 소프트웨어에 구현된 여러 도구는 데이터를 편리하게 관리하는 데 도움을 드립니다. 이 온라인 융합 도구로 원시 데이터 데이터를 유지하거나 병합 이미지만 저장하여 디스크 공간을 확보할 수 있습니다.  데이터는 촬영 중에 자동으로 저장됩니다. 스마트 로딩 기능은 장시간의 데이터 세트에서 관심 있는 시간대 또는 z 스택에 직접 접근할 수 있는 데이터 검토를 제공합니다. 자동 처리 방식으로 원하는 사후 처리 단계를 편집할 수 있습니다.

최적의 환경 조건

소프트웨어 제어식 클라이밋 챔버는 표본에 가장 적합한 환경 조건을 유지합니다. 사용자는 LAS X 환경 제어 모듈을 통해 실험 조건을 완벽하게 제어할 수 있습니다. 기록된 환경 데이터를 실험 중에 모니터링할 수 있습니다. 모든 환경 조건을 하나의 인터페이스 내에서 설정할 수 있습니다. 예를 들어, 열 충격 실험을 위한 온도 프로필을 실행할 수 있습니다.

환경 챔버 또는 스테이지-탑 배양 솔루션 중에서 선택하세요.

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