Aquisição de imagens do tempo de vida em um instante STELLARIS 8 FALCON

O contraste é nítido

O STELLARIS 8 FALCON (FAst Lifetime CONtrast - contraste rápido de tempo de vida) é o futuro da aquisição de imagens funcionais. Faça uso do poder do tempo de vida de fluorescência para investigar a fisiologia celular e explorar a dinâmica em células vivas. O STELLARIS 8 FALCON é uma solução totalmente integrada para Fluorescence Lifetime Imaging (FLIM, aquisição de imagens do tempo de vida da fluorescência) e permite a aquisição de imagens em velocidade de vídeo do tempo de vida para análises cinéticas rápidas em células vivas.

O STELLARIS 8 FALCON adiciona uma nova dimensão de contraste para a sua aquisição de imagens, possibilitando o sensoriamento biológico e o rastreamento de interações entre proteínas. As informações da FLIM agora estão disponíveis para todas as modalidades do sistema STELLARIS 8.

Agora você pode:

Acompanhar interações moleculares rápidas por meio de FLIM-FRET (Förster Resonance Energy Transfer)
Usar biossensores para detectar mudanças no estado metabólico e no microambiente
Aplicar o contraste do tempo de vida para separar múltiplos fluoróforos
Adquirir dados FLIM com o mínimo de treinamento

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Microscópios confocais

Seção histológica de olho de gato. A aquisição de imagens confocais simultâneas espectrais (em cinza) e FLIM (em cores) revela o contraste em função do tempo de vida. Aquisição e visualização usando STELLARIS 8 FALCON e o software LAS X.

Acompanhar interações moleculares com FLIM-FRET

A pesquisa moderna investiga como as moléculas interagem para executar tarefas vitais. O FLIM-FRET é o padrão de excelência para explorar estas interações.

O STELLARIS 8 FALCON define um novo padrão de velocidade para instrumentos FLIM.

Ele permite FRET em eventos celulares altamente dinâmicos. Você pode adquirir e interpretar dados FRET em seus experimentos diários.

AMPc "caged" em células HeLa interpretado pelo sensor EPAC mT2-dVenus FRET. Resposta EPAC à liberação de AMPc mediadas por UV (área central). Filme capturado a 4 fps. Tamanho da imagem: 256 x 256 pixels. Escala de barra de cores (tempo de vida): ns. Cortesia de Kees Jalink, Bram van den Broek, NKI Amsterdam.

Monitore mudanças súbitas e rápidas com biossensores

Biossensores são relatores poderosos para atividades metabólicas, mecanismos sinalizadores, mudanças de pH e do microambiente.

O STELLARIS 8 FALCON proporciona acesso às informações contidas no tempo de vida da fluorescência, mesmo para eventos ultra-rápidos tais como a dinâmica do potencial da membrana. Essas informações complementam a aquisição de imagens espectrais da intensidade de fluorescência e modos TauSense fornecidos pelo sistema STELLARIS 8.

Oscilações de cálcio após estimulação com peptídeo ativador de trombina. A resposta em células individuais é registrada como uma mudança no tempo de vida. Filme capturado a 4 fps. Tamanho da imagem: 256 x 256 pixels. Escala de barra de cores (tempo de vida): ns. Cortesia de Kees Jalink, Bram van den Broek, NKI Amsterdam.

Aquisição mais confiável e sensível de imagens de metabolismo

Autofluorescência pode ser um problema na aquisição de imagens convencional. O STELLARIS 8 FALCON a transforma em informações valiosas. Agora você pode transformar a autofluorescência em um relator do estado metabólico, da diferenciação de células e do desenvolvimento de câncer.

Além disso, o STELLARIS 8 FALCON possibilita o contraste na aquisição de imagens em tecido vivo, onde a marcação da fluorescência muitas vezes não é específica ou destrói condições fisiológicas.

Autofluorescência em células de mamíferos em condições não fisiológicas (pH 8,5). O sinal correlaciona-se com mudanças no pool endógeno de NAD/NADH. O desenvolvimento de estresse oxidativo é interpretado como uma diminuição do tempo de vida da fluorescência ao longo do tempo. Tamanho da imagem original: 512 x 512 pixels. Escala de barra de cores (tempo de vida): ns.

Separação de fluoróforos além das opções espectrais

A marcação da fluorescência é a maneira padrão para diferenciar estruturas intracelulares. A separação espectral é muito poderosa, mas, às vezes, é limitada quando os espectros de emissão estão muito próximos.

Com o STELLARIS 8 FALCON você pode explorar todo o potencial da aquisição de imagens do tempo de vida por fluorescência para separar múltiplas amostras fluorescentes usando adequação exponencial, adequação de padrão e e a nova análise de separação do fasor FLIM.

Imagem interativa Estruturas do citoesqueleto distinguidas pelo contraste do tempo de vida. Imunomarcação de vimentina com Alexa Fluor 555 (verde), e imunomarcação de tubulina com Alexa Fluor 546 (azul). Os fluoróforos são espectralmente muito parecidos, mas são distinguidos usando-se as informações do tempo de vida da fluorescência. Tamanho da imagem: 512 x 512 pixels.

STELLARIS 8 FALCON para a aquisição de imagens do tempo de vida

O microscópio STELLARIS 8 FALCON supera a limitação de velocidade da FLIM e abre as portas para dados rápidos de tempo de vida.

Até o momento, as informações funcionais extraídas dos dados de tempo de vida da fluorescência de processos rápidos eram difíceis de obter devido às limitações técnicas de FLIM. A velocidade de aquisição de FLIM foi pelo menos 10 vezes mais lenta do que o registro da intensidade confocal.

Usando a aquisição de imagens por contraste do tempo de vida do STELLARIS 8 FALCON, você pode acompanhar processos dinâmicos em células na velocidade apropriada. As tarefas são possíveis graças à nova maneira de medir o tempo usando TCSPC (Time-Correlated Single Photon Counting), juntamente com algoritmos inteligentes para processamento e análise dos dados.

Nota de aplicação na revista Nature: SP8 FALCON: um novo conceito na aquisição de imagens confocais FLIM em velocidade de vídeo

Imagem de canal único de grânulos fluorescentes (magenta) em uma solução contendo Alexa Fluor 555 (verde). A separação de fluoróforos baseada no tempo de vida da fluorescência é possível em diversas velocidades, como por exemplo, 16 fps (máximo), 27 fps (sequência de vídeo, centro) e 83 fps (ultrarrápido, em baixo). A utilização das informações do tempo de vida para a separação de corantes é significantemente mais vantajosa do que a intensidade (escala de cinza). Os vídeos mostram a adequação pixel a pixel dos componentes do tempo de vida. Tamanho do quadro: 512 x 64 pixels. Barra de escala: 10 µm.

Aquisição de imagem multimodal multifuncional

A combinação do FLIM com outras modalidades nunca foi tão fácil como com o STELLARIS 8 FALCON. Até agora, pesquisadores tiveram que lidar com cabeamentos complexos e procedimentos morosos de transferência de dados. Com o STELLARIS 8 FALCON, você pode integrar informações de tempo de vida a seu fluxo de trabalho confocal padrão.

O STELLARIS 8 FALCON está completamente integrado ao software de aquisição e análise de dados LAS X. Ele pode registrar a FLIM em quatro canais espectrais simultaneamente e em até 10 canais sequencialmente. O STELLARIS 8 FALCON lhe dá acesso ao contraste do tempo de vida em conjuntos 3D, sequências de lapso de tempo e até grandes formatos em padrão de mosaico.

Com o LAS X NAVIGATOR, você pode expandir a sua área de visão em até 10.000 vezes, poupando tempo valioso na identificação de suas regiões de interesse e explorando suas amostras de uma maneira completamente inovadora.

Aquisição direta de amostras complexas. Imagem de mosaico de alta resolução de um embrião de camundongo com 722 blocos contendo 190 megapixels. Dados FLIM adequados com quatro tempos de vida de fluorescência característica, codificados por cor. Aquisição: 1:23 h. Análise: 1:00 h

Definição direta de tempo de vida com fasores

A análise com o STELLARIS 8 FALCON usando fasores FLIMfornece uma visualização 2D de componentes de tempo de vida. Com fasores FLIM, você pode acompanhar mudanças microambientais, selecionar componentes para multiplexar o sinal e determinar a eficiência do FRET.

Células marcadas com Faloidina-Alexa555 e H2B mCherry. Separação usando fasores FLIM. O gráfico de fases mostra claramente duas distribuições. Cortesia: Dr. Martin Stöckl, Departamento de biologia da Universidade de Konstanz, Alemanha.

Os resultados de que você precisa – com um clique

O software LAS X possibilita o FLIM com um clique e a mesma filosofia da aquisição de imagens espectral rotineira.

Mesmo se usar a microscopia como uma técnica complementar, você pode encontrar os recursos essenciais e começar agora mesmo a aquisição de imagens.

Funções mais especializadas são acessíveis como fluxos de trabalho e permitem uma automação para a sua conveniência.

Filosofia de um clique para você se concentrar em sua pesquisa: STELLARIS 8 FALCON controlado pelo software LAS X.

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