Microscopia de fluorescência
A fluorescência é um dos fenômenos físicos mais comumente usados na microscopia biológica e analítica, principalmente devido a sua alta sensibilidade e alta especificidade. A fluorescência é uma forma de luminescência.
A microscopia de fluorescência permite aos usuários determinar a distribuição de uma espécie de molécula simples, sua quantidade e localização dentro de uma célula. Estudos de colocalização e de interação podem ser realizados, e podem ser observadas concentrações de íons, bem como processos intra e intercelulares como endocitose e exocitose.
Com a ajuda da microscopia de fluorescência de super resolução, ainda é possível captar imagens de estruturas de sub-resolução.
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Microscópios de Luz Fluorescente
Os microscópios de fluorescência usados nas aplicações de pesquisa baseiam-se em um conjunto de filtros óticos:
- um filtro de excitação
- um divisor de feixe dicroico e
- um filtro de emissão
Normalmente, os filtros são conectados juntos em uma cuba de filtro (microscópios compostos) ou em um suporte plano (principalmente microscópios estéreos).
Enquanto o filtro de excitação seleciona os comprimentos de onda para excitar um corante em particular dentro da amostra, o filtro de emissão serve como um tipo de controle de qualidade, deixando passar apenas os comprimentos de onda relevantes emitidos pelo fluoróforo. A finalidade do espelho dicroico é refletir a luz na banda de excitação e transmitir luz na banda de emissão, permitindo a clássica iluminação incidente de epifluorescência.
Microscópios estéreos de fluorescência
Os microscópios estéreos de fluorescência da Leica Microsystems utilizam a tecnologia TripleBeam, um terceiro caminho separado de feixes para iluminação de fluorescência da amostra sem um espelho dicroico.
Portanto, são necessários um filtro de excitação para o caminho de feixes de iluminação e dois filtros de emissão, um para cada caminho de feixes de observação.
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