Microscopia de fluorescência

Microscopia de fluorescência

A fluorescência é um dos fenômenos físicos mais comumente usados na microscopia biológica e analítica, principalmente devido a sua alta sensibilidade e alta especificidade. A fluorescência é uma forma de luminescência.

Microscopia de fluorescência

A fluorescência é um dos fenômenos físicos mais comumente usados em microscopia biológica e analítica, principalmente devido à sua alta sensibilidade e elevada especificidade. A fluorescência é uma forma de luminescência. A microscopia de fluorescência permite até mesmo que os usuários determinem a distribuição de uma única espécie de molécula, sua quantidade e localização dentro de uma célula. Estudos de colocalização e interação podem ser realizados, e as concentrações de íons, assim como os processos intracelulares e intercelulares, como endocitose e exocitose, podem ser observados. Com a ajuda da microscopia de fluorescência de super-resolução, é possível até mesmo capturar imagens de estruturas de sub-resolução.

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Nossos especialistas em soluções para aplicações de fluorescência terão prazer em ajudá-lo com sua orientação.

Aquisição de imagens por fluorescência Leica DMi8

Microscópios de fluorescência

Os microscópios de fluorescência usados em aplicações de pesquisa são baseados em um conjunto de filtros ópticos:

um filtro de excitação
um divisor de feixe dicroico e
um filtro de emissão

Os filtros geralmente são conectados em conjunto em um cubo de filtragem (microscópios compostos) ou em um suporte plano (principalmente estereomicroscópios).

Enquanto o filtro de excitação seleciona os comprimentos de onda para excitar um marcador específico dentro da amostra, o filtro de emissão serve como um tipo de controle de qualidade, permitindo a passagem apenas dos comprimentos de onda de interesse emitidos pelo fluoróforo. O objetivo do espelho dicroico é refletir a luz na banda de excitação e transmitir luz na banda de emissão, permitindo a iluminação clássica da luz incidente de epifluorescência.

Estereomicroscópios de fluorescência

Os estereomicroscópios de fluorescência da Leica Microsystems usam a tecnologiaTripleBeam, um (terceiro) caminho de luz separado para iluminação de fluorescência da amostra sem um espelho dicroico.

Portanto, é necessário um filtro de excitação para o caminho do feixe de iluminação e dois filtros de emissão, um para cada caminho de luz de observação.

Câmeras para microscopia de fluorescência

Para adquirir imagens de fluorescência, é necessário utilizar a câmera de fluorescência CCD ou sCMOS apropriada.

A Leica Microsystems oferece câmeras de fluorescência dedicadas para todas as necessidades de aplicação.

Cada câmera propicia a correspondência perfeita entre sensibilidade e qualidade das imagens para garantir resultados incríveis.

Software para microscopia de fluorescência

A prática configuração e controle dos experimentos estão se tornando cada vez mais importantes na microscopia de fluorescência.

A plataforma de software dedicada Leica Application Suite (LAS) X facilita a configuração até mesmo de experimentos complexos.

O LAS X orienta você desde a configuração até a análise dos dados da aquisição de imagens. Desde experimentos fáceis em vários canais até análises 3D complexas, o LAS X é a plataforma de software perfeita.

Sobre a microscopia de fluorescência

A microscopia de fluorescência se tornou o fenômeno físico mais importante na biologia e medicina modernas.

Após um início lento, a possibilidade de marcação fluorescente alavancou essa aplicação no início da década de 30 do século passado. Por volta de 1950, um segundo estágio foi iniciado com a invenção da marcação de imunofluorescência.

A aquisição de imagens funcionais, com destaque para sondas de Ca++, libertou a metodologia das limitações de apenas fornecer imagens morfológicas e estruturais. A possibilidade de criar materiais vivos com proteínas fluorescentes revolucionou a microscopia de fluorescência para um inesperado e extenso terceiro estágio.

Atualmente, novos métodos que utilizam proteínas fluorescentes estão surgindo semanalmente. E, por último, mas não menos importante: todos os modos de aquisição de imagens de super resolução são baseados em fluorescência.