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Neurônios corticais em cultura (dados originais)
Adquirida com THUNDER Imager 3D Cell Culture

Alto rendimento para maior eficiência do fluxo de trabalho e estatísticas mais precisas

Automatize seus experimentos com cultura de células 3D para estudar a nova geração de modelos de doenças de forma eficiente. O THUNDER permite que você processe uma grande quantidade de amostras como, por exemplo, organoides dos pulmões, em alta velocidade. Além disso, a automação reduz a interação do usuário mesmo em experimentos complexos.

Os resultados são:

  • dados precisos e confiáveis em menos tempo;
  • rendimento mais alto;
  • melhores resultados e estatísticas mais precisas.

Imagem interativa: neurônios corticais em cultura. verde, beta-III-tubulina; azul, núcleos. A pilha de imagens com 59 planos para um volume de 21 µm foi adquirida usando um THUNDER Imager 3D Cell Culture. A imagem original comparada a uma imagem adquirida com o THUNDER Large Volume Computational Clearing. A amostra foi uma cortesia de: FAN GmbH, Magdeburg (Alemanha).

Encontre o THUNDER Imager certo para você

Se está procurando um sistema dedicado de aquisição de imagens de alta qualidade que se destaque em uma determinada aplicação ou uma solução versátil para a execução de diferentes tipos de ensaio em laboratório com várias amostras, nós temos o que você precisa.

Aqui estão alguns exemplos de aplicação selecionados que mostram os pontos fortes do THUNDER:

Quantificação confiável de uma retina de camundongo completa com o THUNDER

Abordagens quantitativas para análise de imagens da retina frequentemente enfatizam o fornecimento de descrições abrangentes da morfologia e função da retina. Anormalidades de retina, além de aplicações clínicas translacionais, precisam de um fluxo de trabalho confiável para reproduzir a triagem de alvos transgênicos. Portanto, a aquisição de imagens repetitivas da morfologia exige uma solução de sistema com resultados precisos que possam ser reproduzidos constantemente. Com o THUNDER Imager 3D Assay, você pode visualizar claramente a morfologia e a contagem de detalhes intracelulares confiáveis, como a distribuição de núcleos de células individuais na retina.

Com um THUNDER Imager 3D Assay, você tem essas vantagens

  •  Remoção de desfoque imediata que ajuda na visualização de mais detalhes intracelulares
  •  Profundidade mais utilizável com abordagem em fluorescência
  •  Quantificação confiável
  •  Pronto para uso na sua análise de fluxo de trabalho específica

Configuração do THUNDER Imager 3D Assay

Controle de toda a retina de camundongo fêmea adulta suíça, que mostra Iba1+ células de microglia (Alexa Fluor® 488 fluorocromo verde ) e Brn3a+ células retinais de ganglio (Alexa Fluor® 594 fluorocromo vermelho). Imagem cortesia do grupo de Oftalmologia Experimental da Universidade de Murcia (Espanha).

Visualização dos organoides cerebrais com um THUNDER Imager 3D Cell Culture

Organoides cerebrais, como sistemas de modelos novos, são usados para investigar o desenvolvimento e distúrbios cerebrais humanos. Essas citoarquiteturas tridimensionais automontadas são frequentemente caracterizadas por meio de múltiplas aquisições de imagens de marcadores transgênicos. Desafios clássicos nesses fluxos de trabalho são a quantificação dinâmica de moléculas oportunamente, além de manter as condições fisiológicas e atingir a profundidade da amostra com baixos níveis de sinal. Portanto, o THUNDER Imager 3D Cell Culture é adequado para o estudo do desenvolvimento de organoides perto de condições fisiológicas, pois nossas fontes de luz LED ajudam a minimizar o photobleaching. Além disso, a expressão cronometrada de níveis de sinais de proteína, apesar de baixos, pode ser obtida, sem a necessidade de mudar a portadora.

Com um THUNDER Imager 3D Cell Culture , você tem estas vantagens

  • A possibilidade de observar suas amostras em placas de petri de fundo de plástico tornando seu fluxo de trabalho mais eficiente
  • Capacidade de detectar sinais baixos de moléculas com câmera de Eficiência Quântica alta
  • Baixo bleaching e pouca perturbação da amostra com abordagem de fluorescência e iluminação LED temporizada e precisa

Configuração do THUNDER Imager 3D Cell Culture

Núcleo (DAPI), Pevimentina (AF488), Dcx (AF568), Pax6 (AF647). Organoide cerebral humano indefinido (quatro cores); imagem cortesia da Attria Kavyanifar, M.Sc. (supervisionado pelo Prof. Dr. Lie, Prof. Dr. Wiener) Clínica Universitária de Erlangen, na Alemanha).

Baixa fototoxicidade na aquisição de imagens de time-lapse de células vivas

Experimentos com aquisição de imagens de culturas celulares de explantes são muitas vezes difíceis de conduzir, pois requerem um ambiente estável de cultura celular e condições com baixa fototoxicidade na aquisição das imagens. Este exemplo de imagem de explante da cultura celular da Dr. Laura Shankmand, da University of Virginia, mostra como as células da aorta abdominais puderam ser vistas de forma estável durante um período de 48 horas. O THUNDER Imager Live Cell fornece um sistema completo de aquisição de imagens de microscopia para experimentos de aquisição de imagens de células vivas minimamente invasivos e precisos. Experimentos de culturas celulares sensíveis podem ser realizados com eficiência, devido a opções de câmera de eficiência e rapidez quântica, platinas precisas, fontes de luz LED ajustáveis, compensação computacional para reduzir distorções fora de foco em imagens widefield e um software LAS X fácil de usar para automatizar fluxos de trabalho de aquisição e análises de imagens.

Vantagens do THUNDER Imager Live Cell

  • Experimentos precisos com aquisição de imagens de células vivas permitem o rastreamento de movimentos celulares rápidos
  • A baixa fototoxicidade mantém a cultura celular sensível viva, mesmo em experimentos de longo prazo
  • Acelere seu fluxo de trabalho de aquisição de imagens de células vivas até a quantificação e análise automatizadas

Configuração do THUNDER Imager Live Cell

Aquisição de imagens de explantes de cultura de aorta abdominal com uma semana, por 48 horas em lâminas de câmara de vidro revestidas com gelatina #1,5. O camundongo foi geneticamente codificado com um tdtomato liso específico à célula muscular. Após um evento de transcrição, as células musculares lisas eliminam o tdtomato e começam a expressar o eGFP.

Condições fisiológicas ideais - mínima exposição à luz

Para cultura de células 3D, observar a verdadeira fisiologia é primordial para resultados significativos. Geralmente, você deseja investigar suas células enquanto elas estão próximas ao estado natural ao otimizar as condições do experimento, p. ex., mínima intensidade da luz e menor tempo de exposição possível.

O THUNDER Imager Live Cell e o 3D Cell Culture atendem essas demandas com uma fonte de LED de alta tecnologia que tem uma pequena largura de banda otimizada para excitação. Mesmo com baixa iluminação e tempo curto de exposição, a câmera sCMOS sensível de alta tecnologia propicia informações significativas sobre as imagens graças à excelente eficiência de até 82%.

Para reduzir ainda mais a exposição da amostra à luz, a iluminação é limitada ao tempo real de aquisição. O obturador da câmera é sincronizado com a fonte de luz LED Lumencor de alta velocidade (tempo de comutação 20 µs) para minimizar o "fotobleaching".

O THUNDER Imager Live Cell e o 3D Cell Culture são baseados em um microscópio DMi8 totalmente motorizado, platina Quantum, uma câmera DFC9000 GTC altamente sensível e fontes de luz LED fluorescentes de alta intensidade e linhas múltiplas. Ele é otimizado para processamento de imagens rápido, em várias posições precisas e multicanais de culturas de células em 3D.

Organoides de pulmões de camundongos derivados de células tronco alveolares e progenitoras. A amostra foi uma cortesia de Dr. Pumaree Kanrai, MPI para pesquisas de coração e pulmões, Bad Nauheim (Alemanha).

Imagens na velocidade da vida – Processos celulares

A vida é rápida, especialmente para uma célula. Os modernos experimentos de processamento de imagens de células vivas exigem sistemas de alta velocidade.

O THUNDER Imager Live Cell e o 3D Cell Culture oferecem a força dos sistemas de fluorescência baseados em câmeras sCMOS altamente sensíveis que trabalham com quadros completos em um só clique.

Combinando a alta sensibilidade, o THUNDER Imager Live Cell e o 3D Cell Culture permitem que você capture dados em até 90 quadros por segundo ajudando a observar eventos celulares rápidos. Eles capturam imagens sem distorções rapidamente mesmo em um grupo espesso de células 3D. Você pode acompanhar processos rápidos mesmo durante experimentos com vários comprimentos de onda de emissão graças às rodas de filtro externos de comutação rápida (< 27 ms).

Mantenha o ambiente adequado enquanto observa as culturas de células vivas

O THUNDER Imager Live Cell e o 3D Cell Culture têm tudo o que você precisa para manter suas células próximas ao estado natural. A incubadora assegura as condições fisiológicas ideais para cultura de células vivas como, por exemplo, estabilidade do sistema, umidade, temperatura e nível de dióxido de carbono (ajuste de pH).

Usando um microrreservatório de imersão em água, você pode usar uma objetiva de imersão em água para fluxos de trabalho em placas multiwell mesmo quando fizer experimentos por períodos longos. As objetivas de imersão em água permitem maior coleta de luz fazendo com que a aquisição de imagens da célula tenha um maior contraste e resolução.

Células VERO cultivadas marcadas com STAR488 Vimentin (verde), STAR580 Tom20 (amarelo) e DAPI (azul). A amostra foi uma cortesia de Abberior GmbH, Göttingen (Alemanha).

Experimentos multiposicionais com tempo transcorrido: rastreando todas as alterações da célula

THUNDER Imager Live Cell e o 3D Cell Culture oferecem a velocidade e a confiabilidade para seus experimentos de cultura de célula 3D em placas multiwell. Por exemplo, quando rastrear o crescimento e o desenvolvimento de esferoides e organoides, a velocidade e a confiabilidade permitem que você obtenha excelentes resultados.

Os experimentos multiposicionais por tempo transcorrido e rastreamento das alterações das células podem ser realizadas com esse THUNDER Imager devido a:

  • Correção confiável de foco com o Adaptive Focus Control (AFC)
  • O foco automático do software que compensa as mudanças na posição da amostra
  • Posicionamento Z reproduzível com uma precisão de até 20 nm (foco em ciclo fechado)

Obtenhas mais pontos de dados em menos tempo com a nova paltina Quantum. Ela se move rápida e precisamente (p. ex.: 10 posições por segundo) em todas as posições com uma excelente repetibilidade (< ±0,25 µm) porque não há agitação.

Rotina, aquisição de dados confiáveis

O THUNDER Imager Live Cell e o 3D Cell Culture permitem a aquisição confiável de dados de imagem com o foco preciso mantido nas células vivas o tempo todo.

Frequentemente, o processamento de imagens de células vivas é complicado devido a desvios, mudanças na morfologia ou crescimento das células. O desvio é causado pelas vibrações, deslizamento mecânico ou variações na temperatura. O desvio e as mudanças das células podem reduzir a confiabilidade dos dados de imagens adquiridas porque o foco torna-se um problema. Com o Adaptive Focus Control (AFC), foco de ciclo fechado e o foco automático do software, o THUNDER Imager Live Cell e o 3D Cell Culture mantêm o foco confiável para seus experimentos com placas multiwell. 

Desenvolvimento do pâncreas de zebrafish - "Widefield"
THUNDER Imager

Desenvolvimento do pâncreas de zebrafish

O THUNDER Imager 3D Assay permitiu a clara identificação de células Alfa (GFP verde) e Beta (mCardinal vermelha) no pâncreas do zebrafish em desenvolvimento.

Com as imagens adquiridas nos canais azul (Hoechst), verde (GFP) e vermelho (mCardinal) esta pilha de 150 imagens  no eixo z foi concluída com todos os canais dentro de um minuto.

As condições fisiológicas podem ser mantidas dentro de uma amostra, pela minimização do fotobranqueamento, proporcionando a aquisição de imagens de alto desempenho e elevada produção de dados, o que leva a uma eficiência melhor do fluxo de trabalho.

Cortesia de imagens do Radhan Ramadass e Yu Hsuan no Max Planck Institute para Pesquisas do Coração e Pulmões, Bad Nauheim (Alemanha)

Adquira imagens e manipule seu experimento de cultura celular

Combine as imagens não invasivas do THUNDER com manipulação de fotos, FRAP, FRET ou técnicas ablativas, usando o Infinity Scanner. Manipule as células que você estuda ou seu ambiente extracelular com o sistema de varredura a laser vetorial flexível do Infinity Scanner.

Os dois vídeos aqui mostram células MDCK expressando mx1-GFP antes e depois da compensação computacional instantânea do THUNDER. Ao utilizar o THUNDER, a expressão da proteína mx1 se tornou muito mais identificável, podendo ser removida com o Infinity Scanner.

Combine o THUNDER Imager 3D Cell Culture com o Infinity Scanner para capturar e manipular seus experimentos de culturas celulares.

Mais informações sobre o Infinity Scanner

Imagens de cortesia do Dr. Ralf Jacob, Universidade de Marburg, na Alemanha

Imagens de cortesia do Dr. Catherine Boyle, Universidade de Virginia, USA

Clareza e velocidade para a aquisição de imagens de amostras sensíveis

Combine a remoção de distorções fora de foco do THUNDER com as vantagens do TIRF. Para processos dinâmicos na superfície celular, a microscopia de fluorescência interna total fornece excelente separação da relação sinal-ruído.

Os dois vídeos aqui mostram células ins-1 que expressam pro-insulina humana com GFP-GRINCH. Conforme o KCL é adicionado à cultura celular, as células produtoras de insulina se despolarizam, e os resíduos de insulina podem ser vistos se fundindo à membrana do plasma.

Com o THUNDER Imager Live Cell combinado com TIRF, você adquire imagens de suas amostras sensíveis com excelente clareza, velocidade e controle de parâmetros na aquisição das imagens.

Mais informações sobre o Infinity TIRF

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