Contacto

Siga las interacciones moleculares por medio de FLIM-FRET

Las investigaciones modernas estudian las interacciones de las moléculas a la hora de llevar a cabo tareas vitales. FLIM-FRET es el método de referencia para explorar dichas interacciones.

STELLARIS 8 FALCON establece un nuevo estándar de velocidad para los instrumentos FLIM.

Permite el uso de FRET para visualizar eventos celulares altamente dinámicos. Con él, podrá adquirir e interpretar los datos FRET en sus experimentos diarios.

Sensor FRET muestra AMPc enjaulado en células HeLa que expresan EPAC con mT2 en Venus. Respuesta de EPAC al proceso de liberación de AMPc mediado por luz UV (zona central). Vídeo grabado a una velocidad de 4 fps. Tamaño de la imagen: 256 × 256 píxeles. Escala de la barra de color (tiempo de vida): ns. Cortesía de Kees Jalink, Bram van den Broek, NKI Ámsterdam.

Oscilaciones en el calcio tras la estimulación con péptido activador de la trombina. La respuesta en las células individuales se registra como un cambio en el tiempo de vida. Vídeo grabado a una velocidad de 4 fps. Tamaño de la imagen: 256 × 256 píxeles. Escala de la barra de color (tiempo de vida): ns. Cortesía de Kees Jalink, Bram van den Broek, NKI Ámsterdam.

Observe cambios rápidos y sutiles a través de biosensores

Los biosensores son importantes mensajeros de la actividad metabólica, ya que señalan los mecanismos, el pH y los cambios en el microentorno.

STELLARIS 8 FALCON proporciona acceso a la información contenida en el tiempo de vida de fluorescencia, incluso en eventos ultrarrápidos como las dinámicas del potencial de las membranas. Esta información complementa la adquisición de imágenes de la intensidad del espectro fluorescente y los modos TauSense producidos por el sistema STELLARIS 8.

Obtención de imágenes metabólicas más fiable y sensible.

Ahora es posible transformar la autofluorescencia en un mensajero del estado metabólico, la diferenciación celular y el desarrollo del cáncer.    

Además, STELLARIS 8 FALCON permite la formación de imágenes del contraste en tejido vivo, donde la marcación fluorescente es a menudo inespecífica o destruye las condiciones fisiológicas. 

Autofluorescencia en células de mamífero en condiciones no fisiológicas (pH 8,5). La señal está correlacionada con los cambios en el contingente endógeno de NAD/NADH. Con el paso del tiempo, el desarrollo de estrés oxidativo se traduce en una disminución del tiempo de vida de la fluorescencia. Tamaño original de la imagen: 512 × 512 píxeles. Escala de la barra de color (tiempo de vida): ns.
Intensidad
FLIM

Separación del fluoróforo más allá de las opciones espectrales

La marcación con fluorescencia es el proceso estándar para diferenciar las estructuras intracelulares. La separación espectral es muy útil, pero, a veces, se ve limitada cuando los espectros de emisión están demasiado cerca.

Gracias a STELLARIS 8 FALCON, puede aprovechar todo el potencial del tiempo de vida de fluorescencia para separar diversas sondas fluorescentes a través del ajuste exponencial, ajuste de patrones y el nuevo análisis de separación de fasores FLIM.

Imagen interactiva: Estructuras citoesqueléticas distinguidas mediante el contraste del tiempo de vida. Inmunomarcaje de vimentina con Alexa Fluor 555 (verde) y de tubulina con Alexa Fluor 546 (azul). Los fluoróforos son muy similares en el plano espectral, pero se pueden distinguir a través de la información del tiempo de vida de fluorescencia. Tamaño de la imagen: 512 × 512 píxeles.

STELLARIS 8 FALCON para la formación rápida de imágenes de tiempo de vida

El microscopio STELLARIS 8 FALCON supera la limitación de velocidad de FLIM y ofrece la oportunidad de acelerar la obtención de datos de tiempo de vida.

Hasta el momento, la información funcional extraída de los datos de tiempo de vida de fluorescencia acerca de procesos rápidos era difícil de obtener debido a las limitaciones técnicas de FLIM. La velocidad de adquisición de FLIM era al menos diez veces más lenta que la grabación de la intensidad confocal.

Gracias a la rapidez de la formación de imágenes de contraste de tiempo de vida mediante STELLARIS 8 FALCON, es posible seguir los procesos celulares dinámicos al ritmo adecuado. Se pueden llevar a cabo tareas de este tipo gracias a una nueva forma de medir el tiempo a través de TCSPC (por sus siglas en inglés, conteo de fotones únicos correlacionado en tiempo) junto a algoritmos inteligentes aplicados al tratamiento y análisis de los datos.

Nota de aplicación recogida en Nature: SP8 FALCON: un nuevo concepto en la formación de imágenes del tiempo de vida de fluorescencia que permite FLIM confocal a velocidad de vídeo.

Imagen de canal única de boliitas fluorescentes (magenta) en una solución que contiene Alexa Fluor 555 (verde). La separación de fluoróforo basada en el tiempo de vida de fluorescencia se puede producir a varias velocidades, por ejemplo: 16 fps (arriba), 27 fps (velocidad de vídeo, centro), y 83 fps (ultrarrápida, abajo). En comparación con la intensidad (escala de grises), el uso de la información de tiempo de vida es mucho más ventajoso para la separación de tinciones. Los vídeos muestran cómo encajan los componentes del tiempo de vida píxel a píxel. Tamaño de la imagen: 512 × 64 píxeles. Barra de escala: 10 µm.
Adquisición sencilla de muestras complejas. Imagen mosaico de alta resolución de un embrión de ratón consistente en 722 imágenes, con un total de 190 megapíxeles. Datos FLIM con cuatro tiempos de vida de fluorescentes característicos, codificados por color. Obtención: 1:23 h. Análisis: 1:00 h

Formación de imágenes multimodal todo en uno

Combinar FLIM con otras modalidades nunca ha sido tan fácil gracias a STELLARIS 8 FALCON. Hasta ahora, los investigadores tenían que lidiar con complejas conexiones y engorrosas transferencias de archivos. Con STELLARIS 8 FALCON, pueden integrar información del tiempo de vida en su proceso de trabajo confocal estándar.

STELLARIS 8 FALCON está completamente integrado en el software de análisis y adquisición LAS X. Puede grabar FLIM en cuatro canales espectrales simultáneamente y hasta en diez canales de forma secuencial. STELLARIS 8 FALCON proporciona acceso a conjuntos 3D de contraste de tiempo de vida, secuencias a cámara rápida e, incluso, formatos grandes en mosaico.

Gracias a LAX X NAVIGATOR, se puede ampliar el área de visión hasta 10.000 veces, ahorrando tiempo al identificar las regiones de interés y explorando las muestras de una forma completamente innovadora. 

Definición sencilla del tiempo de vida con fasores

El análisis conSTELLARIS 8FALCON utilizando fasores FLIM  proporciona una visualización 2D de componentes del tiempo de vida. Con los fasores FLIM es posible seguir los cambios en el microentorno, seleccionar componentes para multiplexar la señal y determinar la eficiencia de FRET.

Células marcadas con Alexa555-Phalloidin y H2B mCherry. Separación realizada utilizando fasores FLIM. El gráfico de fasor muestra claramente dos distribuciones. Cortesía: Dr. Martin Stöckl, Departamento de Biología de la Universidad de Constanza (Alemania). 
Filosofía de 1 clic para concentrarse en la ciencia: STELLARIS 8 FALCON controlado por el software LAS X.

Los resultados que necesita, en un solo clic

El software LAS X permite FLIM con un clic y aplica la misma filosofía que la formación de imágenes espectrales rutinaria.

Aunque la microscopía se use como técnica complementaria, se puede encontrar lo esencial y empezar a obtener imágenes de inmediato.

Hay más funciones especializadas disponibles como flujos de trabajo que permiten la automatización según convenga.

¿Interesado en saber más?

Hable con nuestros expertos. Estaremos encantados de responder a todas sus preguntas e inquietudes.

Contáctenos ahora

¿Prefiere una consulta personal

  • Leica Microsystems Inc.
    1700 Leider Lane
    Buffalo Grove, IL 60089United States
    Teléfono: +1 800 248 0123
    Teléfono de servicio: 1 800 248 0223
    Fax: +1 847-236-3009

Encontrará una lista más detallada de todos los contactos aquí.