Microscopía de fluorescencia

La fluorescencia es uno de los fenómenos físicos más utilizados en microscopía biológica y analítica, sobre todo por su alto grado de sensibilidad y especificidad. La fluorescencia es una forma de luminiscencia.

La microscopía de fluorescencia incluso permite a los usuarios determinar la distribución de una sola especie de molécula, su cantidad y su ubicación dentro de una célula. Se pueden realizar estudios de colocalización e interacción, y se pueden observar las concentraciones de iones y procesos intra y extracelulares como la endocitosis y la exocitosis.

Gracias a la microscopía de fluorescencia con superresolución, incluso es posible captar imágenes de estructuras con subresolución.

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Microscopios ópticos de fluorescencia

Los microscopios de fluorescencia que se emplean en aplicaciones de investigación se basan en una serie de filtros ópticos:

un filtro excitación
un divisor de rayos dicroico
un filtro de emisión.

Los filtros suelen estar insertados en un bloque de filtros (microscopios compuestos) o en un soporte plano (sobre todo en microscopios estereoscópicos).

Mientras que el filtro de excitación selecciona las longitudes de onda que excitan un fluoróforo concreto dentro de la muestra, el filtro de emisión actúa como una especie de control de calidad, ya que solo permite pasar las longitudes de onda de interés emitidas por el fluoróforo. La función del espejo dicroico es reflejar luz en la banda de excitación y transmitir luz en la banda de emisión, lo que permite la iluminación clásica de luz incidente para epifluorescencia.

Este tutorial de fluorescencia explica los elementos ópticos de la trayectoria de luz y el funcionamiento de la microscopía de fluorescencia, tomando como ejemplo un microscopio invertido que se puede utilizar para métodos de contraste con diascopía y para microscopía de fluorescencia.

Microscopios estereoscópicos de fluorescencia

Los microscopios estereoscópicos de fluorescencia de Leica Microsystems utilizan la tecnología TripleBeam, una (tercera) trayectoria de rayos independiente para la iluminación de fluorescencia de la muestra sin espejo dicroico.

Por tanto, se necesitan un filtro de excitación para la trayectoria de rayos de iluminación y dos filtros de emisión, uno para cada trayectoria de rayos de observación.

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Leica M205 FCA & M205 FA | Leica M165 FC | Leica MZ 10 F | Leica Fluocombi III

Microscopios estereoscópicos de fluorescencia Leica M165 FC & M205 FA

Absorción de datos, emisión de belleza

Para adquirir imágenes de fluorescencia hay que utilizar la cámara de fluorescencia CCD o sCMOS adecuada. Leica Microsystems ofrece cámaras de fluorescencia específicas para todas las aplicaciones. Cada cámara ofrece la combinación perfecta de sensibilidad y calidad de imagen, lo que garantiza unos resultados excelentes.

Absorción de complejidad, emisión de sencillez

La facilidad para configurar el equipo y controlar los experimentos está adquiriendo cada vez más importancia en la microscopía de fluorescencia. La plataforma específica de software Leica Application Suite (LAS) X facilita la configuración incluso de experimentos complejos. LAS X guía al usuario desde la configuración hasta el análisis de los datos de la imagen, y es la plataforma de software perfecta tanto para llevar a cabo análisis multicanal sencillos como análisis complejos en 3D.