Microscopía de fluorescencia

Los microscopios de fluorescencia que se emplean en aplicaciones de investigación se basan en una serie de filtros ópticos:

• un filtro excitación
• un divisor de rayos dicroico
• un filtro de emisión.

Los filtros suelen estar insertados en un bloque de filtros (microscopios compuestos) o en un soporte plano (sobre todo en microscopios estereoscópicos). 

Mientras que el filtro de excitación selecciona las longitudes de onda que excitan un fluoróforo concreto dentro de la muestra, el filtro de emisión actúa como una especie de control de calidad, ya que solo permite pasar las longitudes de onda de interés emitidas por el fluoróforo. La función del espejo dicroico es reflejar luz en la banda de excitación y transmitir luz en la banda de emisión, lo que permite la iluminación clásica de luz incidente para epifluorescencia.

Este tutorial de fluorescencia explica los elementos ópticos de la trayectoria de luz y el funcionamiento de la microscopía de fluorescencia, tomando como ejemplo un microscopio invertido que se puede utilizar para métodos de contraste con diascopía y para microscopía de fluorescencia.

La facilidad para configurar el equipo y controlar los experimentos está adquiriendo cada vez más importancia en la microscopía de fluorescencia. La plataforma específica de software Leica Application Suite (LAS) X facilita la configuración incluso de experimentos complejos. LAS X guía al usuario desde la configuración hasta el análisis de los datos de la imagen, y es la plataforma de software perfecta tanto para llevar a cabo análisis multicanal sencillos como análisis complejos en 3D.