Multifotón multicolor para acercarle a la verdad

Microscopio multifotón STELLARIS 8 DIVE

La combinación de múltiples marcadores fluorescentes distintos se usa cada vez más para estudiar la interacción dinámica y las relaciones espaciales entre células y moléculas. El objetivo es comprender una infinidad de eventos biológicos complejos, como la conectividad celular, el fenotipado celular,  la interacción o coexpresión de proteínas y la colocalización. Escalar estos estudios a órganos o tejidos enteros requiere métodos de microscopía multicolor de gran volumen adecuados. DIVE y STELLARIS se han fusionado para proporcionarle la potencia de la obtención de imágenes multicolor multifotónicas flexible. Además, puede ampliar el potencial de sus experimentos con capacidades adicionales de obtención de imágenes sin marcadores fluorescentes.

STELLARIS 8 DIVE se integra a la perfección en la interfaz de software confocal y ofrece las ventajas de una alta velocidad y una navegación excelente para que los procesos dinámicos en muestras complejas se puedan estudiar con facilidad.

STELLARIS 8 DIVE: un arcoíris de posibilidades para su investigación.

El poder de analizar in vivo con más detalle que nunca

STELLARIS 8 DIVE le proporciona la obtención de imágenes multicolor flexible con una profundidad superior a 1mm. Gracias a 4Tune, un detector no descaneado de espectro ajustable, puede definir hasta cuatro bandas de detección simultáneamente o un número ilimitado cuando se crean imágenes secuencialmente en cualquier lugar del espectro de emisión. Le ofrece la flexibilidad necesaria para adaptarse a la combinación de fluorocromos que necesite. Con STELLARIS 8 DIVE, puede realizar experimentos multifotónicos con más de mil millones de combinaciones posibles de fluorocromos, lo que le permite estudiar procesos complejos, como la conectividad neuronal, la estructura orgánica, las interacciones dinámicas o las relaciones espaciales de células y proteínas con mucho más detalle.

Estudie la metástasis en muestras vivas utilizando cuatro o más colores para distinguir las proteínas relevantes, la actividad hipocampal en ratones despiertos o la estructura de secciones intestinales gruesas fijas con STELLARIS 8 DIVE.

Los dicroicos convencionales nunca son óptimos para distinguir todos los fluorocromos, pero con los detectores espectrales, ahora esto es posible y mucho más fácil de realizar, ya que realmente podemos optimizar las longitudes de onda que se desean detectar para cada fluorocromo.

Prof. Dr. Jacco van Rheenen. Instituto contra el Cáncer de los Países Bajos, Ámsterdam (Países Bajos).

Corteza cerebral viva de ratón con neuronas (GFP, en verde) y microglia (YFP, en amarillo) marcadas genéticamente, astrocitos marcados con sulforodamina (en azul) y vaso sanguíneo teñido mediante inyección de Alexa680-Dextran en la vena posterior (en rojo). La serie completa es de ~ 250 x 250 x 250µm. Muestra por cortesía de LMF en DZNE Bonn, Alemania.

DIVE con facilidad: el detector 4Tune

El sistema de detección no descaneada 4Tune puede equiparse desde 2 a 4 detectores y se puede configurar libremente con detectores híbridos (Power HyD NDD), fotomultiplicadores (PMT) o una combinación de ambos. La luz de emisión es separada por una combinación de filtros dicroicos y filtros paso-banda variables. Ajuste libremente su detección en todo el espectro visible (380-800 nm).

La interfaz de usuario de 4Tune le permite optimizar el ajuste de emisiones para múltiples marcadores transgénicos con solo arrastrar y soltar. Gracias a su diseño claro e intuitivo, su funcionamiento es sencillo y requiere una formación mínima.

Con el STELLARIS 8 DIVE estará equipado para todos los marcadores transgénicos existentes y de reciente desarrollo, así como para los marcadores que se desarrollen en el futuro.

Parte superior: 4Tune, sistema de detección no descaneada: 1) Dicroico variable (VD). 2) Paso-banda variable (VB). 3) Power HyD NDD o PMT. Parte inferior: La intuitiva interfaz de usuario de 4Tune permite configurar fácilmente los márgenes de detección para todos los colores, desde 380 hasta 800 nm.
Corteza cerebral de ratón, Thy1-eYFP. Mejorar la profundidad de penetración un 20 % mayor con el ajuste de óptimo. IRAPO 25x1,0 W, motCorr. Muestra por cortesía de Kevin Keppler, Light Microscope Facility, DZNE Bonn (Alemania).

Explore nuevas dimensiones en profundidad

Con el STELLARIS 8 DIVE puede realizar ajustes para obtener el máximo nivel de conocimiento y los más finos detalles. Todos los haces de excitación se pueden ajustar de forma óptima e independiente para cualquier objetivo con el nuevo expansor de haz Vario Beam Expander (VBE).

El VBE permite una colocalización optimizada y el equilibrio adecuado entre resolución y profundidad adaptado al objetivo de su investigación.

Optimice la profundidad y la resolución con el expansor de haz Vario Beam Expander

El expansor de haz Vario Beam Expander VBE de Leica combina la regulación el diámetro de haz y la divergencia. Esto le ofrece la máxima profundidad, la mejor resolución y corrección completa del color.

Diámetro de haz regulable para el mejor equilibrio de resolución y profundidad

El STELLARIS 8 DIVE le permite adaptarse a los requisitos de su muestra. Con el expansor de haz Vario Beam Expander puede elegir entre las siguientes opciones: La resolución máxima, que es el resultado de una apertura trasera totalmente iluminada de la lente objetivo, y la máxima profundidad de penetración, que es el resultado de un llenado ligeramente insuficiente de la apertura trasera. El llenado insuficiente de la apertura posterior propicia un mayor volumen focal y una trayectoria óptica reducida, lo que conduce a una excitación más eficiente.

Divergencia de haz regulable para una corrección completa del color

Nuestros objetivos IR APO no se ven afectados por aberraciones cromáticas en el rango de infrarrojos. Sin embargo, con el STELLARIS 8 DIVE estará listo para usar lentes objetivo aptas para infrarrojos junto con múltiples líneas de láser infrarrojo: El expansor de haz Vario Beam Expander puede utilizarse para corregir desviaciones cromáticas y realizar experimentos multicolor significativos.

Expansor de haz regulable Vario Beam Expander (VBE)

Amplíe el potencial de experimentos in vivo profundos con la obtención de imágenes sin marcadores fluorescentes

Las moléculas como el colágeno y la elastina desempeñan un papel importante en enfermedades como el cáncer. Nuestro detector 4Tune permite el uso de señales de generación de segundo y tercer armónico con las que es posible estudiar estas importantes estructuras sin tinción.

La combinación de DIVE con STELLARIS también permite el uso de información, basada en el tiempo de vida, intrínseca a la fluorescencia. Esta capacidad le permite realizar experimentos como el mapeo metabólico de una muestra a través de la obtención de imágenes de tiempo de vida de NADH o FAD.

Intestinos delgados de ratón Confetti: El colágeno 1 se muestra en gris (SHG sin marcaje) y las células madre trazadas de linaje se muestran en cian, verde, amarillo y rojo. Las células madre desempeñan un papel importante en la propagación del cáncer dentro de los organismos. Muestra por cortesía de Jacco van Rheenen, Instituto del Cáncer de los Países Bajos, Países Bajos.

Navegue fácilmente por el tejido sin necesidad de tinciones adicionales

La navegación a través del tejido a menudo requiere puntos de referencia como orientación para saber dónde se encuentran las áreas de interés. Las propiedades de formación de estructuras del colágeno pueden ayudar a navegar a través del tejido y encontrar áreas de interés sin necesidad de contratinción.

La mayoría de los tejidos biológicos contienen colágeno, que es el componente principal de los tejidos conectivos. Por ejemplo, los intestinos están rodeados por una capa de colágeno. El colágeno se puede visualizar fácilmente en la microscopía multifotónica recogiendo señales de emisión a exactamente la mitad de la longitud de onda de excitación. Gracias a los márgenes de detección flexibles de 4Tune, se puede usar cualquier longitud de onda para recoger esta señal, por lo que no se necesita ninguna tinción o esfuerzo adicional.

Una vez que el microscopista llega a la estructura del colágeno, sabe que su tejido de interés (en este caso, las células madre en los intestinos) está cerca. Intestinos delgados de ratón Confetti: A partir de la generación del segundo armónico (SHG), el gris indica colágeno 1 y células madre con trazas de linaje en cian, verde, amarillo y rojo. Muestra por cortesía de Jacco van Rheenen, Instituto del Cáncer de los Países Bajos, Países Bajos.
Imagen FLIM

Obtención de imágenes multifotónicas de autofluorescencia del embrión de pez cebra tipo salvaje. El contraste de tiempo de vida viene dado por diferentes cofactores y vitaminas. En este caso, el NADH (libre y ligado a proteínas), retinoides y el FADH (libre y ligado a proteínas). Excitación: 740 nm. Emisión: 501-580 nm. Muestra por cortesía de: Francesco Cutrale, Universidad del Sur de California, Los Ángeles.

Combinación de obtención de imágenes multifotónicas e información sobre el tiempo de vida para estudiar los cambios metabólicos

Los cambios metabólicos pueden ser un marcador importante para la salud del tejido.

STELLARIS 8 DIVE le ofrece todas las ventajas de TauSense, un conjunto de herramientas de obtención de imágenes basado en el tiempo de vida de fluorescencia. Cuando el estado metabólico de una célula cambia, esto puede visualizarse mediante cambios en el tiempo de vida de la fluorescencia de las moléculas, como NADH. El NADH desempeña un papel fundamental en el metabolismo del azúcar y su tiempo de vida de fluorescencia depende de la concentración de glucosa. El tiempo de vida de fluorescencia del NADH se ve alterado por un cambio en la conformación que se produce debido a la reacción bioquímica que provoca la descomposición de la glucosa.

Para un análisis cuantitativo completo del tiempo de vida de fluorescencia, STELLARIS 8 DIVE se puede combinar con una técnica FALCON (las siglas de contraste de tiempo de vida rápido).

Autofluorescencia del NADH en células HeLa cultivadas antes y después del tratamiento con glucosa. Izquierda: resultado cualitativo con TauContrast. Derecha: análisis cuantitativo usando la gráfica de fasores en FALCON.

Añada dimensiones adicionales a sus experimentos multifotónicos

La autofluorescencia es una emisión natural de fluorescencia de tejidos procedente de fluorocromos endógenos, como moléculas pequeñas, por ejemplo: NADH o FAD, o estructuras tisulares. A menudo, esto supone un problema a la hora de obtener imágenes de muestras. Pero ¿y si pudiera sacar provecho de la autofluorescencia?

Gracias a la combinación de DIVE y TauSense, ahora puede utilizar la separación basada en el tiempo de vida para obtener información valiosa de las señales de autofluorescencia. Esta capacidad le proporciona un canal adicional que le permite obtener más información de sus valiosas muestras.

Aumente su productividad con las capacidades de software únicas de STELLARIS

Los sistemas multifotón suelen ser rígidos de usar y deben adaptarse a cada experimento y usuario. A esto hay que añadir el estrés de trabajar con animales vivos o tejidos recién explantados. Así se comprende rápidamente la ventaja de tener flexibilidad a la hora de realizar experimentos multifotónicos. STELLARIS 8 DIVE le proporciona un flujo de trabajo sencillo y sin complicaciones desde la configuración hasta los resultados finales gracias a la integración perfecta de las capacidades multifotónicas en el software STELLARIS.

  • Configuración experimental perfecta con ImageCompass
  • Enfoque intuitivo para encontrar un área de interés en su muestra con LAS X Navigator
  • Aumento de la velocidad y la resolución con Dynamic Signal Enhancement

Configuración rápida y sencilla para la obtención de imágenes multicolor multifotónicas con ImageCompass

El hardware multifotón STELLARIS 8 DIVE está totalmente integrado en la interfaz ImageCompass de STELLARIS, lo que le permite definir fácilmente su configuración experimental para un inicio rápido.

El sistema puede definir automáticamente la excitación y la emisión multifotónicas utilizando la extensa base de datos de fluorocromos. También se pueden definir manualmente con solo unos pocos clics. Configuraciones secuenciales y un rápido visor 3D en tiempo real: la obtención de imágenes multicolor multifotónicas nunca fue tan fácil.

Explore los detalles relevantes al instante, manteniendo siempre una vista general de su muestra

LAS X Navigator es una potente herramienta de navegación que le permite pasar rápidamente de buscar imagen por imagen a disponer de una vista general completa de su muestra. Gracias a la integración de DIVE y STELLARIS, ahora sus experimentos multifotónicos pueden ser más eficientes. Benefíciese de la capacidad de navegar libremente por sus muestras grandes y complejas, logrando la obtención de imágenes multicolor profundas con vistas generales rápidas de imágenes multiposición y barrido de mosaicos.

Una imagen en mosaico de un corte de riñón, de 1cm de largo y 0,5mm de grosor, se adquiere fácilmente y proporciona una imagen completa de la célula nerviosa renal y del sistema de colágeno (aquí en combinación con TauContrast).

Mejora de la señal dinámica:

Mantenga la resolución de procesos rápidos in vivo

Los procesos en muestras vivas pueden ser rápidos. Sin embargo, las señales fluorescentes en los modelos animales tienden a ser débiles.

La solución para hacer frente a ambos desafíos es Dynamic Signal Enhancement. Permite promediar una mejor relación señal/ruido y, como consecuencia, una mejor resolución, al tiempo que se adapta a la dinámica de su muestra.

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