STED y STELLARIS: Reinvención de la superresolución

STED y STELLARIS en un solo instrumento le ofrecen las ventajas de sus magníficas capacidades confocales y acceso a una superresolución que proporciona información en profundidad.

POTENCIA 

Estudie múltiples eventos simultáneamente e interacciones moleculares a nanoescala en todo el espectro, gracias a la combinación única de nuestro láser WLL de última generación, la ruta del haz optimizada, los rápidos detectores Power HyD y hasta 3 líneas láser STED.

POTENCIAL

Lleve la obtención de imágenes de superresolución STED al siguiente nivel con la tecnología TauSTED, nuestro nuevo enfoque de tiempo de vida de la fluorescencia basado en STED que ofrece una calidad de imagen de vanguardia y delicadas condiciones para las células vivas.

PRODUCTIVIDAD

Adquiera imágenes confocales y STED sorprendentes con facilidad y configure su experimento con unos pocos clics gracias a la nueva interfaz de usuario ImageCompass.

Confocal
TauSTED

STED para biología celular: la línea TauSTED 775 multicolor para células vivas resuelve la compleja red de citoesqueleto marcada con SiR-tubulina (brillo) y las vesículas de tráfico marcadas con CF594 (cian). Barra de escala: 5 mm . La SiR-tubulina está disponible en Spirochrome. CF594 es cortesía de Biotium, Inc.

STELLARIS STED y STELLARIS 8 STED

STELLARIS ofrece dos opciones para incorporar STED en su sistema: STELLARIS STED, la solución STED todo en uno, y STELLARIS 8 STED, nuestro avanzado sistema actualizable. Ambos ofrecen los mismos beneficios en términos de rendimiento STED, por lo que usted puede centrarse en las capacidades adicionales de STELLARIS a la hora de decidir qué opción se adapta mejor a sus necesidades.

STELLARIS 8 STED

La potencia de STED en STELLARIS 8, para nanoscopia 2D y 3D con hasta 3 líneas STED

  • WLL con excitación desde 440 nm a 790 nm
  • Power HyD S, HyD X e HyD R disponibles para aplicaciones en el espectro rojo extendido
  • TauSTED impulsado por tecnología TauSense y, si FALCON está disponible, con análisis FLIM completo
  • Totalmente actualizable a otras modalidades (FALCON, FCS)

STELLARIS STED

  • STED todo en uno, para nanoscopia 2D y 3D con hasta 3 líneas STED
  • WLL con excitación desde 485 nm a 685 nm
  • Power HyD S e HyD X disponibles
  • TauSTED impulsado por tecnología TauSense

El poder de descubrir más y resolver relaciones moleculares en sus muestras

Para caracterizar los mecanismos que hay detrás de los procesos, como el transporte celular, la diferenciación y la  división celular, usted debe tener la mejor calidad de imagen posible, flexibilidad para diseñar su experimento y velocidad para observar biomoléculas específicas en su entorno nativo.

Gracias a la combinación con la plataforma STELLARIS, STED se beneficia de nuestra tecnología de láser de luz blanca (WLL) / divisor AOBS de última generación, una ruta de haz completamente optimizada, detección espectral con la familia de detectores Power HyD y  múltiples líneas STED (592, 660, 775 nm). STED proporciona imágenes brillantes para caracterizar estructuras con detalle a nanoescala, posibilita la realización de estudios de colocalización con la mayor flexibilidad para la selección de fluorocromos y le permite seguir procesos altamente dinámicos.

STED para la investigación de la malaria: la línea STED 775 3D esclarece los mecanismos detrás de una invasión merozoítica de eritrocitos. Las imágenes muestran superposiciones de RON4 (magenta) con las proteínas PfRh5 (izquierda, verde), PfRipr (centro, verde), PfCyRPA (derecha, verde). La tinción nuclear se muestra en azul y la membrana eritrocítica, en gris. Barra de escala: 1 µm. Imagen por cortesía de Jennifer Volz y Alan Cowman, The Walter y Eliza Hall Institute of Medical Research, Australia, y Marko Lampe, EMBL, Alemania.

Amplíe el número de eventos simultáneos que puede estudiar a nanoescala

El marcado fluorescente multicolor tiene el poder de revelar las relaciones entre especies intracelulares, ya que con él se pueden obtener imágenes de diferentes componentes con especificidad molecular.

STED y STELLARIS destacan en aplicaciones multicolor. Puede utilizar los mejores colorantes en la zona roja del espectro, optar por proteínas fluorescentes en el verde o aprovechar al máximo novedosas sondas fluorogénicas en el naranja. Puede realizar estudios de colocalización de varias especies y resolverlas con detalles de subdifracción.

Nuestra detección espectral le ofrece hasta 5 detectores Power HyD compatibles con STED, por lo que puede ampliar el número de actores moleculares que desea localizar en tiempo y espacio. Además, las capacidades digitales y la velocidad de los detectores Power HyD, con un tiempo muerto del sistema completo de 1,5ns, garantizan una excelente calidad de imagen en términos de la relación señal/ruido y fondo, a la vez que ofrecen al menos 10 veces más de captación de fotones/tiempo de permanencia de píxeles en comparación con los APD.

STED para biología del desarrollo: smFISH* de ARN en una preparación con el embrión completo de Drosophila. Las sondas se marcan directamente y no hay amplificación de señal. Parte superior: la línea TauSTED 775 de tres colores capta la señal de hb CalFluor 610 (cian), gt Quasar 670 (verde) y eve Quasar 705 (magenta). Parte inferior: imágenes confocales del embrión completo de Drosophila. Muestra por cortesía de Tom Pettini, Universidad de Mánchester, Reino Unido. * Hibridación in situ de una sola molécula

Imágenes STED 2D y 3D con excelente brillo y resolución

Con STED y STELLARIS, puede obtener los resultados que necesita en 2D y 3D, ya que la resolución se puede ajustar en x, y, z. Con el fin de asegurar el mejor brillo y resolución en 2D y 3D, le ofrecemos la mejor óptica para garantizar una óptima superposición de la excitación y función de dispersión de punto STED en todo el espectro y garantizar también que las capacidades de cuantificación no se pierdan debido a correcciones adaptativas. Nuestras lentes de objetivo de la clase STED WHITE se han desarrollado especialmente para garantizar unas condiciones óptimas en diversos experimentos con STED:

  • La lente de aceite STED WHITE 100x ofrece la máxima resolución y un rendimiento excelente para la obtención diaria de imágenes de muestras fijas
  • La lente de glicerina STED WHITE 93x proporciona corrección adaptativa a las fluctuaciones de temperatura, desajuste del índice de refracción e irregularidades al observar en profundidad la muestra, gracias a la tecnología motCORR de cuello de corrección totalmente motorizado.
  • La lente de agua STED WHITE 86x con motCORR también proporciona corrección adaptativa, como se explicó anteriormente, y es ideal para aplicaciones delicadas con células vivas y espectroscopia de correlación de fluorescencia STED (1).

(1) “Unas tasas elevadas de recuento de fotones mejoran la calidad de la espectroscopia de fluctuación de la fluorescencia de superresolución” F. Schneider et al. J. Phys. D: Aplic. Phys. 53 164003, 2020.

STED para biología celular: la línea TauSTED 660 3D revela la distribución de poros nucleares (NPC) en células COS7 inmunoteñidas para complejos de nucleoporinas con AF555. El anticuerpo primario mAb414 reconoce varias nucleoporinas del conjunto de poros y produce una tinción similar a la punteada. Tamaño de la imagen: 12 µm, código de color z.

TauSTED: reúne nanoscopia y tiempo de vida

Aumente el potencial de sus experimentos STED gracias a la excepcional resolución, la calidad de imagen y la protección de la muestra que proporciona nuestra tecnología TauSTED patentada.

TauSTED distingue los fotones procedentes del proceso STED de los del fondo, utilizando el gradiente de tiempo de vida de la fluorescencia inducido por la presencia de STED. Como resultado, puede formar imágenes con una resolución superior al STED* convencional con una dosis de luz considerablemente menor, lo que permite una nanoscopia de células vivas con largas tomas time-lapse.

Puede aplicar TauSTED para todos sus experimentos STED, en particular para estudios de colocalización multicolor. Con FALCON, incluso puede separar los colorantes STED espectralmente superpuestos.

*Resolución <30 nm (lateral) y <100 nm (axial), dependiendo de la muestra y el fluorocromo.

Confocal
TauSTED

STED para la investigación de enfermedades renales: imagen multicolor 2D y 3D, obtenida con la línea TauSTED 775, de riñón de ratón no aclarado e inmunoteñido para sinaptopodina (verde) y nefrina (magenta). La lente de glicerina STED WHITE proporciona una corrección adaptativa óptima para resolver las proteínas dentro de la arquitectura tisular altamente compacta. Barra de escala: 10 µm. Muestra por cortesía de Victor Puelles, Milagros Wong y Jan Czogalla, Universitätsklinikum Hamburg-Eppendorf, Alemania.

TauSTED ofrece una resolución sobresaliente con dosis de luz muchísimo más bajas

Cuando busca estrategias de baja iluminación para su experimento STED, hay una pregunta clave: ¿cómo de baja puede ser? La respuesta es muy importante, ya que depende de su muestra y del fluorocromo que se elija.

No prometemos reducciones arbitrarias de la dosis de luz que no estén relacionadas con su experimento. En cambio, podemos mostrarle que TauSTED reduce considerablemente la excitación y la dosis de luz STED para que pueda realizar sus mediciones con éxito a lo largo del tiempo y el espacio. Con TauSTED, se suprime el fondo y se alcanza la mejor resolución, evitando una mayor dosificación de compensación y la pérdida de capacidades de cuantificación.

Esta ventaja es posible gracias a la combinación única de STED con las capacidades de nuestra plataforma STELLARIS: los detectores Power HyD ultrarrápidos y el acceso a la dimensión de tiempo de vida proporcionada por TauSense (STELLARIS STED y STELLARIS 8 STED) y FLIM (STELLARIS 8 FALCON).

STED para biología celular: la línea TauSTED 660 revela la distribución de poros nucleares (NPC) en células COS7 inmunoteñidas para complejos de nucleoporinas con AF555. Solo el 2 % de la luz STED revela muchos más detalles. El anticuerpo primario mAb414 reconoce varias nucleoporinas del conjunto de poros y produce una tinción similar a la punteada.

Ampliar la resolución más allá de los límites convencionales

TauSTED mide la información adquirida en cada experimento STED basada en el tiempo de vida de la fluorescencia y traza la respuesta STED del fluorocromo en tiempo real. El acceso a esta información le permite aumentar la calidad de la imagen (relación señal/ruido), eliminar fotones del fondo mediante principios físicos e impulsar la resolución más allá de los límites de STED basado en la intensidad, independientemente de la excitación y la línea STED (592, 660, 775) que esté utilizando.

TauSTED hace todo esto de forma automatizada, de modo que usted puede centrarse en su muestra y ver detalles que de otro modo se perdería.

Imágenes STED y ADN origami: la línea TauSTED 775 proporciona resoluciones <30nm en GATTA-Bead R cuyo tamaño nominal es de 23nm. Barra de escala: 1 µm.

Superresolución STED delicada para obtener imágenes ampliadas de células vivas ​

La excitación y la dosis de luz STED más bajas se traducen en protección para la muestra.

Esta capacidad permite experimentos con tomas time-lapse más largas, es decir, más fotogramas o imágenes de mayor volumen sin sacrificar la resolución espacial. ​

STED para biología celular: la línea TauSTED 592 delicada para células vivas en células que expresan LifeAct-mNeonGreen de forma estable. Barra de escala: 5 µm. En este caso, la formación de imágenes con tomas time-lapse muestra 230 fotogramas a 1fps. Muestra por cortesía de Max Heydasch, Universidad de Berna (Suiza).

Separar especies con espectros superpuestos utilizando STED-FLIM

Al combinar las modalidades STED y FALCON en STELLARIS 8, es posible obtener una superresolución multicolor con los mejores fluorocromos STED (emisión de infrarrojos lejanos), ya que se pueden separar las especies utilizando su tiempo de vida de la fluorescencia.

Los espectros de emisión de estos fluorocromos se superponen enormemente y no se pueden distinguir con la adquisición de intensidad tradicional. Al combinar STED-FLIM con nuestra separación de fasores automatizada, los fluorocromos se separan claramente utilizando sus distintos tiempos de vida y un solo detector.

STED-FLIM para biología celular: la separación de fasores automatizada de STED 775 y FALCON permite separar especies con espectros superpuestos utilizando su tiempo de vida de la fluorescencia. En las células embrionarias de riñón humano marcadas para vimentina y actina, la información de intensidad de los recuentos de fotones por sí sola (gris) muestra ambas estructuras como indistintas, mientras que se distinguen claramente con STED-FLIM (verde, vimentina AF647; magenta, actina ATTO 647N-faloidina). Barra de escala: 4 µm. Muestra por cortesía de Sebastian Hänsch, Stephanie Weidtkamp-Peters, CAI, Düsseldorf, Alemania.

Aumente su productividad con un STED fácil de configurar

STELLARIS proporciona un acceso directo a STED tanto para principiantes como para expertos. Ahora puede diseñar sus experimentos combinando confocal y multicolor, así como STED 2D y 3D, con solo unos pocos clics.

  • Obtenga resultados fiables gracias a la orientación inteligente de ImageCompass, que se centra en las características de su muestra.
  • Garantice el máximo rendimiento STED con la alineación automática del haz con un solo clic, protegiendo su muestra de la irradiación de luz y logrando el posicionamiento óptimo de los focos láser de forma totalmente automatizada.
  • Obtenga imágenes de grandes áreas al instante con LAS X Navigator y seleccione las regiones de interés para obtener imágenes STED.
  • Valide sus resultados gracias a las capacidades de STELLARIS, como el acceso a datos brutos y el recuento de fotones rápido y eficiente.
Interfaz de usuario ImageCompass para STED en STELLARIS.

Valide sus resultados rápidamente y en una única plataforma

La combinación de STED y STELLARIS significa que puede validar sus resultados, ya que los datos STED, confocales, LIGHTNING y TauSense están disponibles en el mismo sistema.

Esta combinación también significa que puede acceder a sus datos brutos para la cuantificación. TauSTED permite la sustracción de fondo y el ajuste de la resolución a partir de la lectura física de la información del tiempo de vida de la fluorescencia.

Con STELLARIS, siempre tendrá el control sobre su experimento de nanoscopia.

STED para microbiología: flagelos bacterianos visualizados con imágenes correlativas de tres colores confocal-LIGHTNING-STED que permiten la investigación y validación de las muestras utilizando enfoques complementarios. Muestra por cortesía de Marc Erhardt, Humboldt-Universität, Berlín, Alemania.

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