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Microscopia in fluorescenza

La fluorescenza è uno dei fenomeni fisici più comunemente sfruttati nella microscopia biologica e analitica, soprattutto per la sua elevata sensibilità e specificità. La fluorescenza è una forma di luminescenza.

La microscopia in fluorescenza consente agli utenti di determinare la distribuzione di una singola specie di molecole, la sua quantità e la sua localizzazione all'interno di una cellula. È possibile effettuare studi sulla co-localizzazione e sull'interazione e si possono osservare concentrazioni di ioni nonché processi intra ed intercellulari quali endocitosi ed esocitosi.

Con l'ausilio della microscopia in fluorescenza con super-risoluzione, è anche possibile visualizzare strutture sotto risolte.

Per maggiori informazioni sulla microscopia in fluorescenza, sulla fluorescenza quantitativa e sulla super-risoluzione consultare Leica Science Lab.

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Microscopi in luce fluorescente

I microscopi in fluorescenza utilizzati in applicazioni di ricerca si basano su una serie di filtri ottici:

  • un filtro di eccitazione
  • un partitore ottico dicroico e
  • un filtro di emissione

I filtri vengono spesso assemblati  insieme in un cubo portafiltri (microscopi composti) o in un supporto piano (prevalentemente stereomicroscopi).

Mentre il filtro di eccitazione seleziona le lunghezze d'onda per eccitare un particolare marcatore  nel campione, il filtro di emissione svolge una sorta di controllo qualità lasciando passare esclusivamente le lunghezze d'onda oggetto d'interesse emesse dal fluoroforo. La finalità dello specchio dicroico consiste nel riflettere la luce nella banda di eccitazione e nel trasmetterla in quella di emissione, consentendo la classica illuminazione a luce incidente in epifluorescenza.

Questo tutorial sulla fluorescenza illustra gli elementi ottici nel percorso luminoso e la modalità operativa della microscopia in fluorescenza utilizzando come esempio un microscopio rovesciato  che può essere utilizzato per metodi di contrasto in  luce trasmessa e per microscopia in fluorescenza.

Stereomicroscopi in fluorescenza

Gli stereomicroscopi in fluorescenza di Leica Microsystems si avvalgono della tecnologia TripleBeam, un (terzo) percorso ottico separato per l’illuminazione in fluorescenza del campione senza specchio dicroico.

Occorrono pertanto un filtro a eccitazione per il percorso ottico d'illuminazione e due filtri di emissione, uno per ogni percorso ottico di osservazione.

Ottenere informazioni per mostrare la bellezza

Per acquisire immagini in fluorescenza, è necessario utilizzare una fotocamera a fluorescenza CCD o sCMOS appropriata. Leica Microsystems offre fotocamere per fluorescenza dedicate per tutte le esigenze applicative.Ogni fotocamera offre l'abbinamento perfetto tra sensibilità e qualità d'immagine per assicurare risultati eccellenti.

Studiare la complessità con la semplicità d’uso

La semplicità d'impostazione e controllo degli esperimenti sta diventando sempre più importante nella microscopia in fluorescenza. La piattaforma software dedicata Leica Application Suite (LAS) X semplifica il setup persino degli esperimenti più complessi. LAS X vi guida attraverso il setup fino all'analisi dei dati di imaging. Dai semplici esperimenti multicanale alla complessa analisi 3D, LAS X è la piattaforma software perfetta.

Microscopi e sistemi di imaging a fluorescenza 26

Filter by Area of Application

THUNDER Imager Model Organism

THUNDER Imager Model Organism consente l'analisi 3D semplice e rapida di interi organismi modello per ricerche di biologia evolutiva o molecolare.

THUNDER Imager 3D Live Cell & 3D Cell Culture

THUNDER Imager fornisce una soluzione avanzata per le analisi su colture cellulari 3D, quali cellule staminali, sferoidi e organoidi.

High Speed High Resolution Monochrome Fluorescence sCMOS Camera Leica DFC9000

Leica DFC9000

Fotocamera monocromatica a fluorescenza raffreddata da 4,2 MP per applicazioni avanzate come imaging di cellule viventi ad alta velocità, FRAP e Ratio imaging

THUNDER Imager Tissue

THUNDER Imager Tissue consente funzioni di Imaging a fluorescenza in tempo reale di sezioni tessutali 3D, tipicamente utilizzate nelle neuroscienze e nella ricerca istologica.

2.8 MP camera a colori per microscopia Leica DFC7000 T

DFC7000 T and DFC7000 GT

Fotocamera a colori raffreddata da 2.8 MP per documentazione di cellule e tessuti fissati in luce trasmessa ed in fluorescenza

LAS X Life Science

Piattaforma software per le applicazioni in scienze biologiche

Leica M205 FCA & Leica M205 FA

Stereomicroscopio a fluorescenza (semi)-automatico

Leica DM4 B e DM6 B

Leica DM4 B & DM6 B

Aumentate l'efficienza del lavoro con i microscopi diritti digitali per la ricerca Leica DM4 B o Leica DM6 B

L'unico sistema ergonomico con potente illuminazione a LED, il DM2500 è lo strumento ideale per le attività nelle applicazioni delle scienze della vita

Leica DM2500 & DM2500 LED

Microscopi a ergonomia avanzata grazie alla potente illuminazione

Il Leica DM1000 LED combina i vantaggi di un microscopio di sistema dal design completamente ergonomico con un'innovativa illuminazione a LED e le illimitate possibilità dell'uso portatile.

Leica DM1000 LED

Microscopi dall'esclusivo design ergonomico, ora disponibile anche con l'innovativa illuminazione a LED

Leica DFC3000 G, fotocamera per microscopio a fluorescenza

Leica DFC3000 G

Fotocamera monocromatica da 1.3 MP per applicazioni in fluorescenza di base come la documentazione di campioni fissati e immunocolorati

Leica LED3000 BLI

Leica LED3000 BLI

Semplice illuminazione trasmessa a LED

Con il Leica DM IL LED, tutti i metodi di contrasto si adattano facilmente alle singole applicazioni.

Leica DM IL LED

Microscopio rovesciato da laboratorio con illuminazione LED

Microscopio dall'esclusivo design ergonomico Leica DM1000

Leica DM1000

Microscopio dall'esclusivo design ergonomico

Leica TL4000 BFDF

La base a luce trasmessa per applicazioni in campo chiaro e campo scuro assorbe urti e vibrazioni per imaging ad alta qualità

La tecnologia a triplo raggio separa il percorso del raggio destinato specificamente all'illuminazione a fluorescenza.

Leica MZ10 F

Stereomicroscopio modulare per un imaging a fluorescenza dettagliato e ad alto contrasto

L'uso contemporaneo di un obiettivo stereo 1X e di un obiettivo composto 10X o 20X per imaging ad alta risoluzione.

Leica FluoCombi III

Accessori per lo stereomicroscopio a fluorescenza

Il sistema Leica AF6000 realizza analisi d'immagine avanzata a flusso di lavoro guidato avanzate e include una gamma completa di strumenti di miglioramento dell'immagine.

LAS X Widefield Systems

Sistema di microscopia a fluorescenza per imaging avanzato e analisi

Il microscopio dall'esclusivo design ergonomico Leica DM3000 aumenta l'efficienza dei flussi di lavoro nell'ambito della citologia e della patologia grazie all'automazione intelligente.

Leica DM3000 & DM3000 LED

Microscopi dall'esclusivo design ergonomico con automazione intelligente