Coltura cellulare

Aspetto delle cellule

Le cellule animali cresciute in laboratorio possono essere distinte in base a diversi criteri:

• La loro morfologia è semplice da identificare al microscopio. Mentre le cellule fibroblasto-simili hanno una forma bi o multipolare allungata, le cellule epitelio simili mostrano un profilo poligonale. Rispetto alle due precedenti, le cellule linfoblasto simili non crescono attaccate a una superficie, bensì in sospensione.
• È possibile suddividere i tipi di cellula in cellule immortalizzate, primarie e staminali.
• L'organizzazione cellulare può andare dalla semplice mono-coltura 2D alla co-coltura 2D, fino agli sferoidi e organoidi 3D

Qualche esempio di linee cellulari utilizzate nella coltura.

Di che cosa vi occupate quotidianamente?

Poiché gli ingredienti presenti nel mezzo di coltura vengono consumati dalle cellule, è necessario rinnovare il mezzo regolarmente. In questo caso sarebbe opportuno controllare visivamente le colture cellulari per verificare che siano confluenti e sane e per rilevare un'eventuale contaminazione microbiologica.

Una caratteristica delle linee cellulari immortalizzate consiste nella loro crescita indefinita, ecco perché ogni tanto devono essere separate (passaggi) e trasferite in contenitori di coltura diversi.

Quale strumento mi serve?

Un approccio molto semplice di biologia cellulare consiste nel trasfettare le cellule con marcatori fluorescenti per poterle poi analizzare con un microscopio per la ricerca. Se utilizzate proteine fluorescenti il vostro microscopio per colture cellulari avrà bisogno anche della fluorescenza per controllare, ad esempio, che la trasfezione sia efficiente.

Per ottenere un'utile documentazione e una corretta standardizzazione il microscopio dovrebbe presentare una fotocamera digitale e, possibilmente, saper registrare e memorizzare i dati acquisiti.

Poiché lo spazio rappresenta spesso un problema per i laboratori di colture cellulari, il microscopio non dovrebbe essere troppo grande, ma riuscire a stare, ad esempio, sotto una cappa. Inoltre sono richiesti sempre più microscopi piccoli e robusti a sufficienza per poter essere utilizzati addirittura all'interno di un incubatore.

La produzione di biomateriali, come le proteine, i vaccini o gli anticorpi, richiede l'utilizzo di grandi contenitori per cellule in coltura.

Per soddisfare questi requisiti, un microscopio per coltura cellulare su larga scala deve disporre di una distanza di lavoro e di un campo visivo di grandi dimensioni. Inoltre serve un'elevata stabilità per reggere grandi contenitori o addirittura stack di contenitori senza farli cadere. 

Il microscopio Leica DM IL LED può essere configurato con una colonna di illuminazione per luce trasmessa extra lunga, in grado di offrire tutta la distanza di lavoro necessaria per utilizzare contenitori per colture cellulari fino ad un'altezza di 40 cm.

Applicazioni su cellule vive

La coltura cellulare è dinamica. Come qualsiasi altro sistema biologico, la crescita e il comportamento cellulare sono talvolta difficili da prevedere. Ecco perché un monitoraggio costante può risultare vantaggioso rispetto a controlli in un unico momento.

E qui entrano in gioco i microscopi, posizionabili nell'incubatore e capaci di monitorare le cellule 24 ore su 24. Grazie a questa caratteristica è possibile controllare che una coltura cellulare sia, ad esempio, confluente da qualunque posto del mondo e in qualsiasi momento.