STED et STELLARIS : La super-résolution repensée

STED et STELLARIS en un seul instrument vous offrent les avantages de ses brillantes capacités confocales et l’accès à une super-résolution perspicace.

PUISSANCE 

Étudiez simultanément plusieurs événements et interactions moléculaires à l’échelle nanométrique et sur l’ensemble du spectre, grâce à la combinaison unique de notre WLL (laser à lumière blanche) de nouvelle génération, d’un trajet optique optimisé, de détecteurs rapides Power HyD et de 3 lignes laser STED.

POTENTIEL

Faites passer l’imagerie super-résolution STED au niveau supérieur avec TauSTED, notre nouvelle approche STED basée sur le temps de vie de fluorescence qui fournit une qualité d’image de pointe et des conditions d'imagerie douce pour les cellules vivantes.

PRODUCTIVITÉ

Obtenez facilement des images confocales et STED étonnantes et personnalisez votre expérience en quelques clics grâce à la nouvelle interface utilisateur ImageCompass.

Confocal
TauSTED

STED pour la biologie cellulaire : L'imagerie TauSTED sur cellules vivantes à 775nm résout le réseau complexe du cytosquelette marqué à la SiR-tubuline (glow) et les vésicules de trafic marquées au CF594 (cyan). Barre d’échelle : 5 mm . SiR-tubuline par Spirochrome. CF594 avec l’aimable autorisation de Biotium, Inc.

STELLARIS STED et STELLARIS 8 STED

STELLARIS propose deux options pour intégrer STED dans votre système : STELLARIS STED, la solution STED tout-en-un, et STELLARIS 8 STED, notre système évolutif avancé. Les deux offrent les mêmes avantages en termes de performances STED. Ainsi, vous pouvez vous concentrer sur les capacités supplémentaires de STELLARIS au moment de définir l’option qui répondra le mieux à vos besoins.

STELLARIS 8 STED

La puissance STED sur STELLARIS 8, pour la nanoscopie 2D et 3D avec jusqu’à 3 lignes STED

  • WLL avec excitation de 440 nm à 790 nm
  • Power HyD S, HyD X, et HyD R disponibles, pour les applications en rouge lointain
  • TauSTED avec TauSense et, si FALCON est disponible, avec analyse complète en temps de vie de fluorescence (FLIM)
  • Entièrement évolutif vers d’autres modalités (FALCON, FCS)

STELLARIS STED

  • La puissance STED sur STELLARIS 8, pour la nanoscopie 2D et 3D avec jusqu’à 3 lignes STED
  • WLL avec excitation de 485 nm à 685 nm
  • Power HyD S et HyD X disponibles
  • TauSTED avec TauSense

La capacité d’en voir plus et de résoudre les relations moléculaires dans vos échantillons

Pour caractériser les mécanismes cachés de certains processus, tels que le transport, la différenciation et la  division cellulaire, vous devez avoir la meilleure qualité d’image possible, la plus grande flexibilité pour une expérience optimale et une vitesse maximale pour observer des biomolécules spécifiques dans leur environnement natif.

Grâce à l'association avec la plateforme STELLARIS, le STED bénéficie de notre technologie laser à lumière blanche (WLL)/AOBS de nouvelle génération, d’un trajet optique optimisé, d’une détection spectrale avec la gamme de détecteurs Power HyD et de plusieurs lignes STED (592, 660, 775 nm). STED fournit des images claires pour caractériser les structures avec des détails à l’échelle nanométrique, permet des études de colocalisation avec une flexibilité optimale pour la sélection des fluorophores et vous permet de suivre des processus hautement dynamiques.

STED pour la recherche sur le paludisme : Le STED 3D à 775nm permet d’élucider les mécanismes à l’origine d’une invasion des érythrocytes par des mérozoïtes. Les images montrent des superpositions de RON4 (magenta) avec les protéines PfRh5 (à gauche, vert), PfRipr (au centre, vert), PfCyRPA (à droite, vert). Le marquage nucléaire est indiquée en bleu et la membrane des érythrocytes en gris. Barre d’échelle : 1 µm. Image fournie avec l’aimable autorisation de Jennifer Volz, Alan Cowman, Walter et Eliza Hall Institute of Medical Research, Australia, et Marko Lampe, EMBL, Allemagne.

Augmentez le nombre d’événements simultanés que vous pouvez étudier à l’échelle nanométrique

Le marquage en fluorescence multicouleur a le capacité de révéler les liens entre les organelles. Vous pouvez ainsi imager différents composants avec une spécificité moléculaire.

STED et STELLARIS excellent dans les applications multicouleurs. Vous pouvez utiliser les meilleurs sondes dans la portion rouge du spectre, opter pour des protéines fluorescentes dans le vert ou exploiter de nouvelles sondes fluorescentes dans l’orange. Vous pouvez réaliser des études de colocalisation de plusieurs sondes et les résoudre avec des détails en dessous de la limite de diffraction.

Notre détection spectrale vous offre jusqu’à 5 détecteurs Power HyD compatibles STED, ce qui vous permet d’étendre le nombre d’acteurs moléculaires à localiser dans le temps et l’espace. De plus, les capacités numériques et la vitesse des détecteurs Power HyD, avec 1,5 ns de temps mort total du système, vous garantissent une excellente qualité d’image en termes de rapport signal/bruit et de bruit de fond, tout en offrant au moins 10 fois plus de temps de collecte de photons/pixel dwell time que les APD.

STED pour la biologie du développement : smFISH* d’ARN dans une préparation d’embryon de drosophile entier. Les échantillons sont directement marqués et il n’y a pas d’amplification du signal. En haut : Le TauSTED 775 à trois couleurs capture les signaux de hb CalFluor 610 (cyan), gt Quasar 670 (vert) et eve Quasar 705 (magenta). En bas : imagerie confocale de l’embryon entier de drosophile. Échantillon fourni avec l’aimable autorisation de Tom Pettini, Université de Manchester, Royaume-Uni. * Hybridation in situ de molécules uniques

Imagerie STED 2D et 3D avec une intensité et une résolution exceptionnelles

Avec STED et STELLARIS, vous obtenez les résultats souhaités en 2D et 3D car la résolution devient réglable en x, y et z. Pour vous garantir une clarté et une résolution maximales en 2D et 3D, nous vous fournissons les meilleures solutions optiques pour une superposition optimale de l’excitation et  de la PSF STED sur l’ensemble du spectre et pour que les capacités de quantification ne soient pas perdues en raison de corrections adaptatives. Notre classe de verres objectifs STED WHITE a été spécialement développée pour garantir des conditions optimales pour une variété d’expériences STED :

  • L'objectif à immersion huile STED WHITE 100x fournit la plus haute résolution et offre d’excellentes performances pour l’imagerie quotidienne d’échantillons fixes
  • L'objectif à immersion glycérol STED WHITE 93x fournit une correction adaptative des fluctuations de température, des changement d'indice de réfraction et des inhomogénéités lorsque l’on observe en profondeur dans l’échantillon, grâce à la technologie de bague de correction entièrement motorisée motCORR
  • L'objectif à immersion eau STED WHITE 86x avec motCORR fournit également une correction adaptative, comme expliquée ci-dessus, et est idéal pour les applications sur cellules vivantes délicates et la STED-FCS (1).

(1) “High photon count rates improve the quality of super-resolution fluorescence fluctuation spectroscopy” F. Schneider et al. J. Phys (Des taux de comptage de photons élevés pour une qualité accrue de la spectroscopie de fluctuation de fluorescence à super-résolution). D : Appl. Phys. 53 164003, 2020.

STED pour la biologie cellulaire : Le TauSTED 3D à 660nm révèle la distribution des pores nucléaires (NPC) sur les cellules COS7 immunocolorées avec AF555. L’anticorps primaire mAb414 reconnaît plusieurs nucléoporines du pore et produit un marquage ponctué. Taille de l’image : 12 µm, code couleur z.

TauSTED La nanoscopie rencontre le temps de vie de fluorescence

Élargissez le potentiel de vos expériences STED grâce à la résolution exceptionnelle, à la qualité d'image et à la protection des échantillons garanties par notre technologie TauSTED exclusive.

TauSTED distingue les photons provenant de l'effet STED de ceux du background en utilisant le gradient de temps de vie de fluorescence induit par la présence de déplétion STED. Par conséquent, vous pouvez obtenir une imagerie avec une résolution supérieure à celle d’une image STED* conventionnelle à une dose de lumière nettement inférieure, ce qui permet une nanoscopie des cellules vivantes sur des longues durées.

Vous pouvez appliquer TauSTED à toutes vos expériences STED, en particulier dans le cadre d’études de colocalisation multicouleur. Avec FALCON, vous pouvez même séparer les fluorochromes STED qui se chevauchent spectralement.

*Résolution <30 nm (latéral) et <100 nm (axial), selon l’échantillon et le fluorophore.

Confocal
TauSTED

ÉTAPE pour la recherche sur l’insuffisance rénale : TauSTED 775 2D et 3D multicouleur d’un rein de souris non transparisé immunocoloré pour la synaptopodine (vert) et la néphrine (magenta). L'objectif à immersion glycérol STED WHITE fournit une correction adaptative optimale pour résoudre les protéines au sein de l’architecture tissulaire très compacte. Barre d’échelle : 10 µm. Échantillon fourni avec l’aimable autorisation de Victor Puelles, Milagros Wong et Jan Czogalla, Universitätsklinikum Hamburg-Eppendorf, Allemagne.

TauSTED offre une résolution exceptionnelle à des doses de lumière nettement inférieures

La recherche de stratégies de faible éclairage pour vos expériences STED soulève une question clé : Quelle est la valeur la plus basse ? La réponse est loin d’être simple, car elle dépend de votre échantillon et du fluorophore choisi.

Nous ne promettons pas une réduction arbitraire des doses de lumière qui ne serait pas liée à votre expérience. En revanche, nous pouvons vous montrer que le TauSTED réduit considérablement l’excitation et la puissance de laser de déplétion STED afin que vous puissiez effectuer vos mesures efficacement, dans le temps et l’espace. Avec TauSTED, vous éliminez le bruit de fond pour une résolution optimale, évitant ainsi concentration trop forte de fluorochromes et une perte de capacités de quantification.

Cet avantage est rendu possible par la combinaison unique du STED avec les capacités de notre plateforme STELLARIS : les détecteurs HyD ultra-rapides et l’accès au temps de vie de fluorescence fournis par TauSense (STELLARIS STED et STELLARIS 8 STED) et FLIM (STELLARIS 8 FALCON).

STED pour la biologie cellulaire : Le TauSTED 3D à 660nm révèle la distribution des pores nucléaires (NPC) sur les cellules COS7 immunocolorées avec AF555. Seulement 2 % de puissance laser STED révèle beaucoup plus de détails. L’anticorps primaire mAb414 reconnaît plusieurs nucléoporines du pore et produit un marquage ponctué.

Repousser les limites de la résolution

TauSTED mesure les données sur le temps de vie de fluorescence acquises lors de chaque image STED et cartographie la réponse STED du fluorophore en temps réel. L’accès à ces informations vous permet d’améliorer la qualité de l’image (signal/bruit), d’éliminer les photons du bruit de fond à l’aide de principes physiques et de repousser la résolution STED au-delà des limites seulement basées sur l’intensité, quelles que soient l’excitation et le laser STED (592, 660, 775) que vous utilisez.

TauSTED fonctionne de manière entièrement automatisée, ce qui vous permet de vous concentrer sur votre échantillon et d’étudier des détails qui vous échapperaient autrement.

Imagerie STED et ADN origami : TauSTED 775 fournit des résolutions <30 nm sur GATTA-Bead R dont la taille nominale est de 23 nm. Barre d’échelle : 1 µm.

Super-résolution STED douce pour une imagerie sur cellules vivantes ​

L’excitation et la dose de lumière STED plus faibles se traduisent par une protection de l’échantillon.

Cette capacité permet des expériences plus longues, c’est-à-dire plus d'images ou une imagerie d'un plus grand volume sans sacrifier la résolution spatiale. ​

STED pour la biologie cellulaire : Imagerie douce TauSTED 592 de cellules vivantes exprimant de manière stable LifeAct-mNeonGreen. Barre d’échelle : 5 µm. L’image en temps réel montre 230 images à 1 ips. Échantillon fourni avec l’aimable autorisation de Max Heydasch, Université de Berne, Suisse.

Séparer les fluorochromes avec des spectres qui se chevauchent à l’aide de STED-FLIM

La combinaison des modalités STED et FALCON sur STELLARIS 8 permet une super-résolution multicouleur avec les meilleurs fluorophores STED (rouge lointain), car vous pouvez séparer les espèces en utilisant leur temps de vie de fluorescence.

Les spectres d’émission de ces fluorophores se chevauchent fortement et ne peuvent pas être distingués à l’aide de l’image d’intensité traditionnelle. Le STED-FLIM associé à notre module automatisé de séparation Phasor permet de séparer clairement les fluorophores par leur temps de vie distinct à l'aide d'un seul détecteur.

STED-FLIM pour la biologie cellulaire : Le STED 775 et le module automatisé de séparation Phasor FALCON permettent de séparer les fluorochromes dont les spectres se chevauchent en utilisant leur temps de vie de fluorescence. Dans les cellules HEK marquées pour la vimentine et l’actine, l’intensité de signal issue du comptage de photons (gris) montrent les deux structures comme indistinctes, tandis qu’elles sont clairement discriminées avec le STED-FLIM (vert, Vimentine AF647; magenta, Actine ATTO 647N-phalloïdine). Barre d’échelle : 4 µm. Échantillon fourni avec l’aimable autorisation de Sebastian Hänsch, Stephanie Weidtkamp-Peters, CAI, Düsseldorf, Allemagne.

Renforcez votre productivité avec un système STED facile à configurer

STELLARIS propose un accès direct au STED pour débutants et experts. Vous pouvez désormais réaliser vos expériences en combinant confocal et multicouleur, ainsi que le STED en 2D et 3D, en quelques clics seulement.

  • Des résultats fiables grâce l'interface intelligente ImageCompass qui se concentre sur les caractéristiques de votre échantillon.
  • Des performances STED optimales grâce à l’autoalignement du laser en un clic, protégeant ainsi votre échantillon de l’irradiation lumineuse et permettant un positionnement optimal des lasers de manière entièrement automatisée.
  • Une imagerie de vastes zones en un rien de temps avec LAS X Navigator. Sélectionnez vos zones d’intérêt pour l’imagerie STED.
  • Validez vos résultats grâce aux fonctionnalités STELLARIS, comme l’accès aux données brutes et le comptage de photons rapide et efficace.
Interface utilisateur ImageCompass pour STED sur STELLARIS.

Validez vos résultats rapidement et sur une plateforme unique

La combinaison STED et STELLARIS vous permet de valider vos résultats, car les données STED, confocales, LIGHTNING et TauSense sont toutes disponibles dans le même système.

Cette combinaison vous permet également d’accéder à vos données brutes à des fins de quantification. TauSTED permet de soustraire le bruit de fond et d’ajuster la résolution à partir de la lecture physique des informations sur le temps de vie de fluorescence.

Avec STELLARIS, vous contrôlez toujours votre expérience de nanoscopie.

STED pour la microbiologie : Observation de flagelles bactériens par imagerie corrélative à trois couleurs confocale et STED permettant d'étudier et de valider des échantillons avec des approches complémentaires. Échantillon fourni avec l'aimable autorisation de Marc Erhardt, Humboldt-Universität, Berlin, Allemagne.

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