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TauSTED Xtend: Nitida. Semplice. Fantastica.

TauSTED Xtend è il passo successivo nell'evoluzione dell'imaging TauSTED. Combina informazioni basate sul tempo di vita con una lettura spaziale aggiuntiva. Ciò si traduce in un significativo aumento della risoluzione, utilizzando potenze di deplezione STED inferiori, consentendo di estendere le capacità di imaging multicolore in-vivo a una notevole scala nanometrica. Scarica l'application note e scopri di più su TauSTED Xtend.

POWER

Risolvi i dettagli più piccoli su scala nanometrica. Esegui imaging in-vivo più a lungo con una risoluzione all'avanguardia.

POTENTIAL

Utilizza i fluorofori standard e segui i protocolli preferiti per STED. Esegui imaging multicolore, anche con una singola linea laser STED.

PRODUCTIVITY

Monitora direttamente i processi rapidi con risoluzione su scala nanometrica. Ottieni un feedback immediato sui risultati durante l'esecuzione degli esperimenti.

TauSTED Xtend Confocale

Campione fissato multicolore. TauSTED Xtend 775; Vimentina AF 594 (ciano), falloidina ATTO 647N (magenta) e NUP107 CF680R (luminescenza). Larghezza dell'immagine: 39 nm. Campione su gentile concessione di Brigitte Bergner, Mariano Gonzales Pisfil, Steffen Dietzel, Core Facility Bioimaging, Biomedical Center, Università Ludwig-Maximilian, Monaco di Baviera, Germania

Imaging multicolore in-vivo su notevole scala nanometrica

L'imaging dinamico effettuato su campioni in-vivo è ancora l'approccio sperimentale più impegnativo. Per ottenere risultati scientificamente rilevanti, il regime di illuminazione deve essere, a seconda del campione e del fluoroforo, sufficientemente basso da evitare il fotobleaching e la fototossicità.

Con STELLARIS, che include i laser a luce bianca (WLL) di ultima generazione, i rilevatori Power HyD e l'accesso alle tecnologie basate sul tempo di vita (TauSense, FALCON), l'imaging multicolore in-vivo e gli esperimenti di imaging funzionale sono diventati di routine nella microscopia confocale.

Con TauSTED Xtend è possibile ridurre significativamente la potenza di eccitazione e la dose di luce STED a un livello tale da consentire di studiare i processi biologici per periodi di tempo prolungati anche su scala nanometrica.

Cellule in vivo che esprimono LifeAct-mNeonGreen. TauSTED Xtend 589. Formato 6 k, 30 min di imaging STED. Campione su gentile concessione di: M. Heydasch, Istituto di biologia cellulare, Università di Berna, Svizzera.

Risolvi i dettagli più piccoli nel contesto su scala nanometrica

Cerchi strategie di super-risoluzione che ti permettano di seguire i tuoi target biologici di interesse nel tempo e nello spazio con minime perturbazioni esterne?

TauSTED riduce già significativamente l'eccitazione e le dosi di luce STED, migliorando significativamente la risoluzione rispetto all'imaging confocale standard e agli approcci STED gated classici.

TauSTED Xtend va oltre, migliorando la risoluzione massima ottenibile, e rivelando un segnale inequivocabile, anche a una potenza di deplezione STED inferiore.

[Translate to italian:] TauSTED Xtend reveals the distribution of nuclear pores (NPCs) on COS7 cells immunostained for NUP complexes with AF 488.  Only 0.5% of STED light reveals much more detail.
[Translate to italian:] TauSTED Xtend reveals the distribution of nuclear pores (NPCs) on COS7 cells immunostained for NUP complexes with AF 488. Only 0.5% of STED light reveals much more detail.

La risoluzione viene spinta oltre i limiti convenzionali

TauSTED misura le informazioni basate sul tempo di vita della fluorescenza acquisite in ogni esperimento STED e mappa la risposta STED del fluoroforo in tempo reale. L'accesso a queste informazioni consente di aumentare la qualità dell'immagine (rapporto segnale-rumore), eliminare i fotoni dal background utilizzando principi fisici e spingere la risoluzione oltre i limiti dello STED basato sull'intensità, indipendentemente dall'eccitazione e dalla linea STED (589, 660, 775) in uso.

TauSTED Xtend è il passo successivo nell'evoluzione dell'imaging STED e combina le informazioni basate sul tempo di vita con una lettura spaziale aggiuntiva. Noterai un significativo aumento della risoluzione, soprattutto a potenze di deplezione STED inferiori, consentendoti di migliorare le capacità di imaging in-vivo a una notevole scala nanometrica.

STED e DNA origami imaging: TauSTED 775 offre risoluzioni <30&#160;nm su GATTA-Bead R la cui dimensione nominale è 23&#160;nm. Scale bar: 1 µm.
STED e DNA origami imaging: TauSTED 775 offre risoluzioni <30&#160;nm su GATTA-Bead R la cui dimensione nominale è 23&#160;nm. Scale bar: 1 µm.

Utilizza i protocolli standard

Desideri raggiungere la scala nanometrica nei tuoi esperimenti utilizzando protocolli familiari e un'ampia gamma di marcatori fluorescenti comunemente usati nella ricerca sulle scienze biologiche?

TauSTED Xtend offre nuove opportunità per esperimenti singoli e multicolore con proteine fluorescenti verdi e fluorofori che sono un cavallo di battaglia nella ricerca sulle scienze biologiche e sono attualmente poco utilizzati negli studi di nanoscopia.

È possibile ampliare la gamma di fluorofori, anche con una singola linea laser STED, sfruttando le capacità spettrali uniche di STELLARIS.

STED Confocale

2c Imaging TauSTED Xtend di cellule di mammifero marcate con CF 440 - Falloidina (luminescenza) e immunocolorate contro tubulina, StarGreen (ciano). Scale bar: 2 µm

Amplia il numero di eventi simultanei che puoi studiare sulla nanoscala

La marcatura a fluorescenza multicolore ha il potere di rivelare relazioni tra specie intracellulari, perché consente di acquisire immagini di diversi componenti con specificità molecolare.

STED e STELLARIS eccellono nelle applicazioni multicolore. È possibile utilizzare i migliori coloranti nella regione rossa dello spettro, optare per proteine fluorescenti nel verde o sfruttare nuove sonde fluorogene nell'arancione. È possibile eseguire studi di colocalizzazione di più specie e risolverle con un livello di dettaglio al di sotto del limite di diffrazione.

Il nostro sistema di rilevamento spettrale ti offre fino a 5 detector Power HyD con capacità STED, in modo da poter estendere il numero di target molecolari da localizzare nel tempo e nello spazio. Inoltre, le funzionalità digitali e la velocità dei detector Power HyD, con un dead time del sistema pari a 1,5 ns, garantiscono un'eccellente qualità dell'immagine in termini di rapporto segnale-rumore e background, raccogliendo in un pixel dwell time almeno 10 volte il numero dei fotoni rispetto ad un detector APD.

STED per la biologia dello sviluppo: smFISH* di RNA nella preparazione di un embrione di Drosophila a montaggio intero. Le sonde sono direttamente coniugate e non c'è amplificazione del segnale. In alto: TauSTED 775 a tre colori cattura il segnale da hb CalFluor 610 (ciano), gt Quasar 670 (verde) ed eve Quasar 705 (magenta). In basso: imaging confocale dell'intero embrione di Drosophila. Campione su gentile concessione di Tom Pettini, Università di Manchester, Regno Unito.
*Ibridazione in situ di una singola molecola
STED per la biologia dello sviluppo: smFISH* di RNA nella preparazione di un embrione di Drosophila a montaggio intero. Le sonde sono direttamente coniugate e non c'è amplificazione del segnale. In alto: TauSTED 775 a tre colori cattura il segnale da hb CalFluor 610 (ciano), gt Quasar 670 (verde) ed eve Quasar 705 (magenta). In basso: imaging confocale dell'intero embrione di Drosophila. Campione su gentile concessione di Tom Pettini, Università di Manchester, Regno Unito.
*Ibridazione in situ di una singola molecola

Espandi le capacità STED multicolore con la separazione basata sul tempo di vita

Combinando le modalità STED e FALCON su STELLARIS 8, è possibile ampliare ancora di più la gamma di fluorofori per studiare l'interazione molecolare a risoluzione nanoscopica, poiché è possibile separare le specie utilizzando il loro tempo di vita.

Gli spettri di emissione di questi fluorofori non possono essere distinti utilizzando l'acquisizione tradizionale basata sull'intensità. Combinando STED-FLIM con la nostra separazione phasor automatica, i fluorofori sono chiaramente separati sfruttanto la differenza nei loro tempi di vita e utilizzando un solo detector per acquisire entrambi i marcatori.

Separazione STED per la biologia cellulare: Lo STED 775 e la separazione FALCON STED consentono di separare le specie con spettri sovrapposti utilizzando il tempo di vita della loro fluorescenza. Nelle cellule U2OS marcate con TOM20 e tubulina, le informazioni di intensità ottenute attraverso la conta dei fotoni (grigie) mostrano entrambe le strutture come indistinte, mentre sono chiaramente distinguibili con STED-FLIM (ciano, AF 647- tubulina; magenta ATTO 647N-TOM20).
Separazione STED per la biologia cellulare: Lo STED 775 e la separazione FALCON STED consentono di separare le specie con spettri sovrapposti utilizzando il tempo di vita della loro fluorescenza. Nelle cellule U2OS marcate con TOM20 e tubulina, le informazioni di intensità ottenute attraverso la conta dei fotoni (grigie) mostrano entrambe le strutture come indistinte, mentre sono chiaramente distinguibili con STED-FLIM (ciano, AF 647- tubulina; magenta ATTO 647N-TOM20).

Monitora in real time i risultati nel tempo e nello spazio

Osserva ciò che accade nel tuo esperimento, nel tempo e nello spazio con una risoluzione su scala nanometrica. Con TauSTED Xtend puoi valutare rapidamente i processi in real time e ricevere un feedback istantaneo sui risultati durante l'esecuzione degli esperimenti.

Assicurati le massime prestazioni STED effettuando l'autoallineamento del fascio laser con un solo clic, proteggendo il campione dall'irradiazione della luce e ottenendo il posizionamento ottimale delle messe a fuoco del laser in modo completamente automatico.

Acquisisci grandi aree in pochissimo tempo con LAS X Navigator e seleziona le regioni di interesse per l'imaging STED.

Valida i tuoi risultati grazie alle capacità di STELLARIS di effettuare un conteggio dei fotoni rapido ed efficiente e di mantenere sempre la possibilità di accesso ai dati grezzi.

Dinamica citoscheletrica in cellule in vivo con TauSTED Xtend 589. Cellule di neuroblastoma di topo con LifeAct-mNeonGreen che mostrano la dinamica dei filamenti di actina, linea cellulare. Su gentile concessione di: Prof. Olivier Perutz, Max Heydasch. Università di Berna, Svizzera.

Imaging STED 2D e 3D con luminosità e risoluzione eccezionali

Con i microscopi STELLARIS STED, è possibile ottenere i risultati di cui hai bisogno sia in 2D che 3D poiché la risoluzione è regolabile in x, y e z. Al fine di garantire la migliore luminosità e risoluzione in 2D e 3D, i nostri microscopi forniscono le migliori ottiche per assicurare una sovrapposizione ottimale della PSF di eccitazione con quella STED lungo tutto lo spettro e che le capacità di quantificazione non vadano perse a causa di correzioni adattive.

La seguente classe di obiettivi STED WHITE è stata appositamente sviluppata per garantire condizioni ottimali per una varietà di esperimenti STED:

  • Le lenti a olio STED WHITE 100x offrono la massima risoluzione e prestazioni eccellenti per l'imaging quotidiano di campioni fissati.
  • La lente a glicerolo STED WHITE 93x fornisce una correzione adattativa per fluttuazioni di temperatura, mancata corrispondenza dell'indice di rifrazione e disomogeneità quando si osserva in profondità il campione, grazie alla tecnologia del collare di correzione completamente motorizzato motCORR.
  • La lente ad acqua STED WHITE 86x con motCORR fornisce anche una correzione adattiva (come spiegato sopra) ed è la soluzione ideale per applicazioni live-cell delicate e STED-FCS (1).

(1) “High photon count rates improve the quality of super-resolution fluorescence fluctuation spectroscopy” F. Schneider et al. J. Phys. D: Appl. Phys. 53 164003, 2020.

STED e DNA origami imaging: TauSTED 775 offre risoluzioni <30&#160;nm su GATTA-Bead R la cui dimensione nominale è 23&#160;nm. Scale bar: 1 µm.
STED e DNA origami imaging: TauSTED 775 offre risoluzioni <30&#160;nm su GATTA-Bead R la cui dimensione nominale è 23&#160;nm. Scale bar: 1 µm.
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