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Fluorescence

La fluorescence est l'un des phénomènes physiques les plus couramment utilisés en microscopie biologique et analytique, principalement en raison de sa grande sensibilité et de sa haute spécificité. La fluorescence est une forme de luminescence. La microscopie par fluorescence permet même aux utilisateurs de déterminer la distribution d'une seule molécule, sa quantité et sa localisation à l'intérieur d'une cellule. Des études de colocalisation et d'interaction peuvent être effectuées, et des concentrations d'ions ainsi que des processus intra et intercellulaires comme l'endocytose et l'exocytose peuvent être observés. Grâce à la microscopie par fluorescence à super-résolution, il est même possible d'obtenir des images de structures à sous-résolution. Pour en savoir plus sur la microscopie par fluorescence, la fluorescence quantitative et la super-résolution, consultez le Leica Science Lab.

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Nos experts en solutions pour les applications de fluorescence sont à votre disposition pour vous conseiller.

Microscopes à lumière fluorescente

Les microscopes à fluorescence utilisés dans les applications de recherche sont basés sur un ensemble de filtres optiques:

  • un filtre d'excitation
  • un séparateur de faisceau dichroïque et
  • un filtre antipollution

Les filtres sont souvent branchés ensemble dans un cube de filtre (microscopes composites) ou dans un support plat (principalement des microscopes stéréo).

Alors que le filtre d'excitation sélectionne les longueurs d'onde pour exciter un colorant particulier dans l'échantillon, le filtre d'émission sert en quelque sorte de contrôle de qualité en ne laissant passer que les longueurs d'onde d'intérêt émises par le fluorophore. Le but du miroir dichroïque est de réfléchir la lumière dans la bande d'excitation et de transmettre la lumière dans la bande d'émission, ce qui permet l'éclairage incidente classique par épifluorescence.

Ce tutoriel sur la fluorescence explique les éléments optiques du trajet lumineux et le mode de fonctionnement de la microscopie à fluorescence en prenant l'exemple d'un microscope inversé qui peut être utilisé pour les méthodes de contraste de lumière transmise et la microscopie à fluorescence.

Microscopes stéréoscopes à fluorescence

Les microscopes stéréoscopes à fluorescence de Leica Microsystems utilisent la technologie TripleBeam, un trajet de faisceau séparé (troisième) pour l'éclairage par fluorescence de l'échantillon sans miroir dichroïque. Par conséquent, un filtre d'excitation pour le trajet du faisceau lumineux et deux filtres d'émission, un pour chaque trajet du faisceau d'observation, sont nécessaires.

Leica M205 FCA & M205 FA | Leica M165 FC | Leica MZ 10 F | Leica Fluocombi III 

Caméras pour la microscopie à fluorescence

Pour acquérir des images de fluorescence, il est nécessaire d'utiliser la caméra de fluorescence CCD ou sCMOS appropriée. Leica Microsystems propose des caméras fluorescentes dédiées à toutes les applications. Chaque caméra offre une correspondance parfaite entre sensibilité et qualité d'image pour garantir de superbes résultats.

Logiciel de microscopie par fluorescence

La simplicité de mise en place et de contrôle des expériences est de plus en plus importante dans la microscopie par fluorescence. La plate-forme logicielle Leica Application Suite (LAS) X facilite la mise en place d'expériences même complexes. LAS X vous guide de la configuration à l'analyse des données d'imagerie. De l'expérimentation multi-canal simple à l'analyse 3D complexe, LAS X est la plateforme logicielle parfaite.